产品资料 – 表观遗传学 – 甲基化依赖型限制性内切酶
McrBC
#M0272L 2,500 units
#M0272S 500 units
识别位点
特性
测定 CpG 二核苷酸的甲基化状态
测定胞嘧啶甲基化的 DNA
与 McrBC 一起温育的人类和果蝇基因组 DNA。在脊椎动物中估计有 60-90% 的 CpGs 是被甲基化的（6），而果蝇 DNA 中甲基化的 CpGs 非常稀少（大约 12.5 kb 的 DNA 中仅出现一个甲基胞嘧啶，7）。泳道 1：人类 DNA；泳道 2：与 McrBC 一起温育的人类 DNA；泳道 3：果蝇DNA；泳道 4：与 McrBC 一起温育的果蝇 DNA；泳道 M：BstEII 消化的 λDNA（NEB #N3014）。
概述
McrBC 是一种核酸内切酶，无论甲基胞嘧啶* 是在 DNA 的一侧链上还是在对侧链上，McrBC 都能切割。对未甲基化的 DNA，Mc rBC 无作用。DNA 上 McrBC 的识别位点由两个 (G/A)mC 形式的半位点组成，这两个半位点之间的距离可以达到 3 kb，但是最佳距离为 55-103 bp。McrBC 的切割需要 GTP，当存在不可水解的 GTP 类似物时，该酶可以特异地结合到甲基化 DNA 上，但不能进行切割。McrBC 作用于一对 PumCG 序列元件,以此检测高比例甲基化的 CpGs，但是不能识别内部胞嘧啶甲基化了的 HpaII/MspI 位点（CCGG）。
* 5-甲基胞嘧啶、5-羟甲基胞嘧啶或者 N4-甲基胞嘧啶。
来源
两种组成蛋白分别纯化自含有编码 McrB 和 McrC 质粒的 E.coli K-12 菌株。
反应条件
NEBuffer 2 + BSA + GTP，37℃ 温育。
热失活：65℃ 20 分钟。
随酶提供的试剂
10X NEBuffer 2
100X BSA
100X GTP (100 mM)
对照质粒 DNA
单位定义
1 单位指在 50 μl 反应体系中，37℃ 条件下，1 小时切割 0.5 μg 含有多个 McrBC 位点的质粒所需要的酶量。
浓度
10,000 units/ml。
注意事项
McrBC 在每对半位点之间切割一次，切割位点靠近某一个半位点，但是通常距最近的甲基化碱基大约 30 bp。因此，当 DNA 中存在多个 McrBC 半位点时（例如胞嘧啶甲基化基因组DNA），识别序列的可变性导致位点重叠，产生弥散状而不是细窄的条带。