Dinaciclib (SCH727965)是一种新型有效的CDK抑制剂，作用于CDK2，CDK5，CDK1和CDK9，无细胞试验中IC50分别为1 nM，1 nM，3 nM和4 nM。它也会阻断胸甘(dThd) DNA整合。

靶点

体外研究

Dinaciclib抑制CDK1和CDK9 效果差不多，但是抑制CDK2和CDK5效果则分别强12和14倍。Dinaciclib作用于A2780细胞，有效抑制的DNA复制，抑制胸甘(dThd)DNA摄入,IC50为4 nM。Dinaciclib 浓度大于6.25 nM时，强抑制Rb在Ser 807/811位点磷酸化。Rb磷酸化的完全抑制与凋亡发生相关，通过用浓度大于6.25 nM 的Dinaciclib处理的细胞中p85 PARP裂解产物的出现来表示。 Dinaciclib有效作用于广谱人肿瘤细胞系。在羟基脲处理期间加入Dinaciclib,也抑制γ-H2AX累积,这种作用存在剂量依赖性。Dinaciclib 抑制恶性黑色素瘤细胞增殖,使恶性黑色素瘤细胞发生大规模凋亡。Dinaciclib诱导一些骨肉瘤 细胞系凋亡，包括抗Doxorubicin和Dasatinib的细胞。Dinaciclib 降低RNAP II 在 serine 2位点磷酸化，也降低CDK抑制剂p27Kip1在threonine 187位点磷酸化。加入12 nM 到40 nM Dinaciclib处理4小时或16小时，最易使磷酸化作用降低。Dinaciclib也降低Rb在serine 807/811位点磷酸化。Dinaciclib诱导mock-和p53-耗尽的U2OS细胞凋亡，凋亡程度相似。

体内研究

Dinaciclib 每天按8, 16, 32,和48 mg/kg 剂量腹腔注射处理 ，持续10天，导致肿瘤受抑制分别为70%, 70%, 89%,和 96%。Dinaciclib MED(最低有效剂量)约为小于8 mg/kg。Dinaciclib耐药性良好, 且最高剂量处理组中体重损失最高为5%。Dinaciclib 在体内具有抗癌活性，存在剂量依赖性，按低于MTD(最高耐受剂量)的剂量水平处理，几乎完全抑制肿瘤生长。Dinaciclib作用于小鼠，具有短暂的血浆半衰期。

BMS-265246

MB4023

BS-181 HCl

MB4024

Palbociclib (PD0332991) Isethionate

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.5221 mL

12.6107 mL

25.2213 mL

5 mM

0.5044 mL

2.5221 mL

5.0443 mL

10 mM

0.2522 mL

1.2611 mL

2.5221 mL

50 mM

0.0504 mL

0.2522 mL

0.5044 mL

Cyclin/CDK激酶实验:
设计从Sf9细胞中纯化的重组cyclin/CDK 全酶，产生表达特定cyclin 或CDK的杆状病毒。 在含 50 mM Tris-HCl (pH 8.0), 10 mM MgCl2, 1 mM DTT,和 0.1 mM原钒酸钠的反应buffer中，Cyclin/CDK 复合体稀释成终浓度为 50 μg/mL。每种激酶反应中, 1 μg酶和 20 μL 2-μM 底物溶液 (组蛋白 H1衍生的一种生物素化的肽段) 混合，然后与10 μL 稀释的Dinaciclib结合。加入 50 μL 2 μM ATP和 0.1 μCi 33P-ATP反应开始。激酶反应在室温下进行1小时，然后加入 0.1% Triton X-100, 1 mM ATP, 5 mM EDTA, 和5 mg/mL 链霉亲和素包被的SPA 磁珠而终止反应。使用96-孔GF/B过滤板和Filtermate广谱收集器 收集SPA 磁珠。用 2 M NaCl 冲洗磁珠两遍，然后用含磷酸的2 M NaCl 再冲洗两遍。使用TopCount 96孔液体闪烁计数器测定信号。

细胞实验

• Cell lines: A2780细胞
• Concentrations: 0 μM-5 μM
• Incubation Time: 24小时
• Method: A2780 细胞培养在含10%FBS的DMEM培养基上，每周移动两次，通过使用胰蛋白酶-EDTA分离单细胞层。在96孔Cytostar-T板上每孔加入 100 μL A2780细胞 (5 ×103个)，然后在37oC下温育16到24小时。Dinaciclib 在含2% 14C标记 dThd的完全培养基上连续稀释。培养基从 Cytostar T板上转移，按一式四份加入200 μL 多种Dinaciclib 稀释液，然后细胞在37oC下温育24小时。使用闪烁亲近法测定，在TopCoun上测量累积的放射性标记物渗透率。

动物实验

• Animal Models: 携带A2780肿瘤的裸鼠
• Formulation: 20%羟丙基-β-环糊精
• Dosages: 8 mg/kg, 16 mg/kg, 32 mg/kg,和 48 mg/kg
• Administration: 腹腔注射