EPZ005687是一种有效的，选择性EZH2抑制剂，无细胞试验中Ki为24 nM，比作用于EZH1选择性高50倍，比作用于15种其他蛋白甲基转移酶选择性高500倍。

靶点

体外研究

EPZ005687抑制PRC2酶活性，这种作用具有浓度依赖性，IC50为54 nM。EPZ005687直接抑制PRC2酶活性，不通过破坏PRC2亚基之间的蛋白-蛋白相互作用而发挥功能。EPZ005687结合到EZH2 SET结构域的SAM口袋，是SAM竞争性的EZH2酶活性抑制剂。EPZ005687作用于含野生型和Tyr641突变型EZH2的PRC2复合体的亲和力是相似的（在2倍的范围内），而作用于A677G突变体酶则具有更显著的较高亲和力（5.4倍）。EPZ005687作用于多种不同的淋巴瘤细胞，减少H3K27甲基化。对含杂合Tyr641或Ala677突变型细胞具有强大的杀伤力，对野生型细胞增殖的影响最低。EPZ005687增加了细胞周期的G1期，相应地，降低S及G2/M期。EPZ005687作用于Tyr641突变的淋巴瘤细胞系，使已知的EZH2靶基因脱抑制，且影响EZH2 Tyr641突变特异性抑制的基因。

EPZ6438

MB4407

GSK126

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.8530 mL

9.2649 mL

18.5298 mL

5 mM

–

–

–

10 mM

–

–

–

50 mM

–

–

–

生化酶学检验:
化合物与每孔40 μL 5 nM PRC2(50 μL中的实验终浓度为4 nM ) 在1X实验缓冲液(20 mM Bicine [pH 7.6], 0.002% Tween-20, 0.005% Bovine Skin Gelatin 和 0.5 mM DTT)中温育30分钟。每孔10 μL底物混合物包括实验缓冲液3H-SAM，未标记的SAM，加入代表组蛋白H3残基21-44的肽（包含C-末端生物素，附加到C-末端酰胺封端的赖氨酸上），开始反应，终反应混合物中的每种底物都处于其各自的Km值，这种实验形式被称为“平衡条件”。终浓度底物与每组酶反应指定的甲基化状态的底物肽在室温下温育90分钟，然后每孔使用10 μL 600 μM 未标记的SAM淬灭，然后转移到384孔闪光板上，30分钟后进行洗涤。

细胞实验：

• Cell lines: OCI-LY19, WSU-DLCL2, Pfeiffer
• Concentrations: ~10 μM
• Incubation Time: 11 天
• Method: 根据线性对数期生长，测定每组细胞的接种密度。进行细胞计数，实验第4和7天，在含EPZ005687的新鲜培养基中，细胞分裂回原来的接种密度。

Pinometostat (EPZ5676)是一种蛋白甲基转移酶DOT1L的S-腺苷甲硫氨酸(SAM)竞争性抑制剂，无细胞试验中Ki为80 pM，比作用于所有其他测试的PMTs选择性高37000倍以上，抑制肿瘤中H3K79甲基化。

靶点

体外研究

EPZ-5676减少了MV4-11细胞中H3K79双甲基化，IC50是2.6 nM。EPZ-5676浓度和时间依赖性降低H3K79甲基化，而对其他组蛋白位点无作用，这导致在MLL重排的白血病细胞中抑制的关键靶的MLL基因并选择性的凋亡细胞杀伤。EPZ-5676抑制MLL-AF4重新排列细胞系MV4-11的增殖，IC50为9 nM。

体内研究

在MLL重排的白血病异种移植模型中，EPZ-5676连续静脉滴注21天后导致剂量依赖性的抗肿瘤活性。在最高剂量为70.5毫克/公斤/天时，肿瘤完全消退后治疗停止，长达32天都没有肿瘤再生长。在EPZ-5676治疗的大鼠中，无显著体重减轻或明显毒性出现。

GSK126

MB3680

RG108

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.7771 mL

8.8856 mL

17.7711 mL

5 mM

0.3554 mL

1.7771 mL

3.5542 mL

10 mM

0.1777 mL

0.8886 mL

1.7771 mL

50 mM

0.0355 mL

0.1777 mL

0.3554 mL