Tazemetostat (EPZ-6438)是一种有效的，选择性EZH2抑制剂，无细胞试验中Ki 和 IC50分别为2.5 nM 和 11 nM，比作用于EZH1选择性高35倍，比作用于14种其他HMT选择性高4500多倍。

特性

口服生物可利用的野生型和突变型EZH2选择性抑制剂。目前处于临床Ⅱ期试验，用于治疗弥漫性大B细胞性淋巴瘤。

靶点

体外研究

EPZ-6438浓度依赖性降低野生型或SMARCB1突变细胞中总体H3K27Me3水平，并引起去除SMARCB1的MRT细胞系中强的抗增殖作用， IC50范围为32 nM 到 1000 nM。EPZ-6438引起神经元分化的基因表达和细胞周期抑制，同时抑制Hedgehog通路基因，MYC 和 EZH2。在几种EZH2突变体淋巴瘤细胞中，EPZ-6438的抗增殖作用被氢化泼尼松或地塞米松增强。

体内研究

皮下注射 G401异种移植物的SCID小鼠体内，EPZ-6438引起肿瘤郁积，并且在给药期间，产生显著的肿瘤生长延迟，而对体重影响较小。

GSK126

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.7460 mL

8.7300 mL

17.4599 mL

5 mM

5 mM

0.3492 mL

1.7460 mL

10 mM

–

–

–

50 mM

–

–

–

生物化学法:
EPZ-6438与5 nM 40微升每孔的PRC2 (50微升中终测试浓度为4 nM ) 在1X试验缓冲液中(20 mM二羟乙甘胺酸 [pH 7.6]，0.002% Tween-20，0.005% Bovine Skin Gelatin 和0.5 mM DTT)培育30分钟。加入10微升每孔的底物混合物，以启动反应(基底以它们各自的Km值存在于最终反应混合物，即以一种被称为“平衡状态”的形式存在），底物混合物由试验缓冲液3 H-SAM，未标记的SAM，和代表包含C端生物素(附加到C端被酰胺包被的赖氨酸) 的组蛋白H3残基21-44的缩氨酸组成。基底的终浓度和基底肽的甲基化状态表明，每个酶反应在室温下培育90分钟，并用10微升每孔600 μM未标记的SAM淬灭，然后转移到384孔闪烁板，30分钟后进行洗涤。

细胞实验

• Cell lines: 突变细胞系(G401，A204，G402，KYM-1)，野生型细胞系(RD，293，SJCRH30)
• Concentrations: ~10 μM
• Incubation Time: 7天
• Method: 对于贴壁细胞系增殖测定法，每个细胞系的镀层密度基于生长曲线(由ATP含量测定)，由超过7天的时间过程来确定。化合物处理的前一天，细胞以一式三份接种于96孔板(进行0–7天)或6孔板(7 天后取代96孔板进行其余部分)。第0天，细胞是未处理的，DMSO处理的，或用起始浓度10 µM，和稀释3倍或4倍的EPZ-6438处理。板在第0天，第4天，第7天使用Cell Titer Glo读数，在第4天重新装满化合物/介质。第7天，将6孔板用胰蛋白酶处理，离心，重新悬浮在新鲜培养基中，通过Vi细胞计数。每种处理的细胞重复三份再以原始密度接种于96孔板中。细胞粘附到板上过夜，在第0天处理细胞。板在第7，11，和14天，使用Cell Titer Glo进行读数，在第11天重新装满化合物/介质。使用三个重复测试的平均值描绘增殖与时间进程的曲线，并计算IC50值。对于细胞周期和细胞凋亡，G401 与 RD细胞重复两份以每平板1 × 106个细胞接种于15-cm培养皿。细胞在1 µM EPZ-6438 下进行培养，总体积为25毫升，时间超过14天，细胞在第4，7，和11天被换为初始密度。细胞周期分析和TUNEL试验通过Guava流式细胞仪，按照生产商方案进行。

动物实验

• Animal Models: 皮下注射G401异种移植物的SCID小鼠。
• Formulation: 0.5% NaCMC 加 0.1% Tween 80 水溶液
• Dosages: ~500毫克/千克
• Administration: 口服给药

Erastin是一种ferroptosis激活剂，通过作用于线粒体VDAC而起作用，选择性作用于携带致癌基因RAS的肿瘤细胞。

靶点

Ferroptosis

体外研究

Erastin选择性致死致癌的Ras突变体细胞系，并触发独特的fe依赖性的称为ferroptosis的非凋亡细胞死亡。Erastin直接结合VDAC2并且使得通过NADH-依赖方式产生ROS导致线粒体损害，在一些表达激活突变的肿瘤细胞中，通过RAS-RAF-MEK途径诱导细胞死亡。此外，erastin通过诱导ROS介导的CID（胱天蛋白酶非依赖性细胞死亡），强烈增强了野生型EGFR细胞的作用。

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.8280 mL

9.1401 mL

18.2802 mL

5 mM

0.3656 mL

1.8280 mL

3.6560 mL

10 mM

0.1828 mL

0.9140 mL

1.8280 mL

50 mM

–

–

–

• Cell lines: BJ-TERT/LT/ST/RASV12细胞
• Concentrations: 5 or 10 μg/mL
• Incubation Time: 6-11小时
• Method: BJ-TERT/LT/ST/RASV12细胞接种在100 mm平皿中，并使其生长过夜。细胞用erastin（5或10微克/毫升）处理6，8，或11小时。camptothecin处理（0.4微克/毫升）的对照被维持，在接种的时候处理20小时。处理后，细胞用胰蛋白酶/EDTA孵育并用含血清的新鲜培养基洗1次，然后用磷酸盐缓冲盐水洗涤两次。细胞同1×结合缓冲液重悬。100 μL重悬细胞在5μL的膜联蛋白V-FITC和碘化丙啶iodiode在黑暗中孵育15分钟。然后加入400 μl的1×结合缓冲液S并用流式细胞仪分析。采集数据，并使用CellQuest软件进行分析。只有不被碘化丙啶染色的活细胞使用FL1通道的膜联蛋白V-FITC染色分析。

TESTS

SPECIFICATIONS

Appearance

White powder

Identification

HNMR

Purity(HPLC)

≥98%

Erdosteine 是一种祛痰剂，用于治疗过多粘稠的粘液。

靶点

NF-κB

体外研究

Erdosteine是一种口服溶纤剂，用作各种慢性呼吸道疾病的祛痰剂。EdodoStin通过抑制脂多糖刺激的小鼠巨噬细胞中NF-κB的激活而发挥抗炎作用。然而，Erdosteine不抑制LPS诱导的Akt和MAPK通路的磷酸化。为了评价厄多司坦对巨噬细胞的毒性作用，分析了细胞活力。1, 10或100μg/mL厄多司坦治疗不产生可检测的细胞毒性。LPS(1μg/mL)诱导RAW 264.7细胞IκBα降解，10min后达到最大降解，用指示浓度的Erdosteine预处理RAW 264.7细胞6h，然后用LPS(1μg/mL)刺激10min。对IκBα基线值无影响。单独使用DMSO，其体积与厄尔多斯汀给药的体积相等，对IκBα的基线量没有任何影响。LPS处理10min可减少IκBα的量，而厄尔多斯汀预处理在一定浓度和时间能有效抑制IκBα的降解。

体内研究

将26只雄性小鼠分成如下四组：第1组，对照; 第2组，Erdosteine治疗; 第3组，甲氨蝶呤（MTX）治疗; 和第4组，甲氨蝶呤+ Erdosteine治疗。 在实验的第一天，向第3组和第4组腹膜内施用单剂量的甲氨蝶呤，尽管每日单剂量的厄多司坦口服给予第2组和第4组7天。 在实验结束时，移除动物的睾丸并称重。 甲氨蝶呤组的总抗氧化能力和总氧化应激水平以及髓过氧化物酶活性均高于对照组（p <0.05）。 与对照组相比，甲氨蝶呤组的脂质过氧化水平没有变化。 总之，厄多司坦可有效保护甲氨蝶呤诱导的睾丸毒性。 使用甲氨蝶呤的厄多司坦可改善睾丸损伤，如曲细精管中精子发生的表现所示。

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

4.0111 mL

20.0554 mL

40.1107 mL

5 mM

0.8022 mL

4.0111 mL

8.0221 mL

10 mM

0.4011 mL

2.0055 mL

4.0111 mL

50 mM

0.0802 mL

0.4011 mL

0.8022 mL

• 小鼠巨噬细胞和单核细胞细胞株RAW264.7维护在杜尔贝科修改鹰年代介质层(DMEM)含10%胎牛血清,60 U /毫升青霉素,链霉素在37.8摄氏度和100μg /毫升5%的二氧化碳。用比色四唑化合物MTS测定细胞活力。简而言之,104细胞与不同浓度的孵化Erdosteine(1、10或100μg /毫升)24 h处理10μL MTS的解决方案(5毫克/毫升)45分钟。然后用异丙醇溶解细胞,和读取吸光度的波长540 nm。

动物实验

• 小鼠
• 二十六只雄性C57BL／6小鼠（8周，20～30g）随机分为四组。在对照组（n＝6）中，小鼠腹腔注射0.5毫升生理盐水作为安慰剂（腹腔注射）。在Erdosteine组（n＝6）中，用Erdosteine口服（灌胃，10 mg/kg）7天。在这项研究中，使用低剂量MTX，因为高剂量（20-40mg/kg）MTX具有抗炎和免疫抑制活性。MTX组（n＝7）用单剂量腹腔注射MTX（10 mg/kg）。MTX +厄多司坦组（n＝7），第一次注射小鼠腹腔注射MTX（10 mg/kg），给Erdosteine口服（10 mg/kg），开始第7天。最后一次给药后，所有大鼠禁食约12小时，但可以自由饮水。然后在实验结束时，用颈椎脱位处死动物。牺牲后，睾丸被迅速从小鼠体内移除。右睾丸标本固定在10%中性缓冲甲醛溶液组织学评估。