Ezetimibe 是一种有效的、选择性的胆固醇吸收抑制剂，用来降低胆固醇。

靶点

NPC1L1

体外研究

Ezetimibe显著降低总胆固醇，LDL胆固醇和甘油三酸酯，以及适度增加高密度脂蛋白胆固醇。在Caco-2细胞中，Ezetimibe降低31％的胆固醇运输，但不影响黄醇转运。Ezetimibe导致表面受体SR-BI，Niemann-Pick C1型类似蛋白1，ATP结合盒转运子，亚族A（ABCA1）和核受体维甲酸受体（ RAR）的γ，固醇调节元件结合蛋白（SREBP）-1和-2，肝X受体（LXR）的β亚基的mRNA的表达显著降低。

体内研究

西式，含低脂肪且无胆固醇饮食的小鼠中，Ezetimibe降低血浆胆固醇水平分别从964至374 毫克/分升，从726至231毫克/分升，而从516至178毫克/分升。Ezetimibe减少主动脉粥样硬化病变的表面积，从对照组的20.2％到西方饮食组的4.1％和低脂肪胆固醇饮食小鼠的7.0％。Ezetimibe减少颈动脉粥样硬化病变的横截面面积，在西部和低脂胆固醇饮食组中为97%，在无胆固醇的小鼠中为91%。在西部，低脂肪和无胆固醇的饮食的小鼠中，Ezetimibe抑制胆固醇吸收，降低血浆胆固醇，增加高密度脂蛋白水平，并抑制动脉粥样硬化。在临床前动物模型中，Ezetimibe有效抑制胆固醇运输穿过肠壁，从而降低血浆胆固醇血症。在大鼠中，Ezetimibe消除肠道的胰腺外分泌功能，同时保持胆汁流量。在胆固醇喂养的仓鼠中，Ezetimibe降低血浆胆固醇和肝胆固醇积累，ED50为0.04 毫克/千克。

依泽替米贝;依折麦布(标准品)

MB25757

依泽替米贝-d4

MB25759

3-O-乙酰依泽替米贝-d4

MB25758

二醋酸盐依泽替米贝-d4

MB25762

依泽替米贝羟基β-D-葡萄糖苷酸-d4

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.4426 mL

12.2130 mL

24.4260 mL

5 mM

0.4885 mL

2.4426 mL

4.8852 mL

10 mM

0.2443 mL

1.2213 mL

2.4426 mL

50 mM

0.0489 mL

0.2443 mL

0.4885 mL

• GST-p62由大肠杆菌制备，0.5μg纯化的GST-p62蛋白用于体外AMPK磷酸化测定。 通过使用γS-ATP的非放射性同位素方法测定AMPK对p62蛋白的磷酸化。 从HEK293细胞免疫纯化AMPK复合物，用Flag-AMPKβ1和HA-AMPKγ1转染myc-AMPKα1野生型（WT）或myc-AMPKα1激酶死亡突变体（KD，D157A）。 将AMPK复合物加入到含有20mM HEPES，pH7.4,1mM EGTA，0.4mM EDTA，5mM MgCl 2,0.05mM DTT，0.5μgGST-p62,0.2mM AMP和1mMATPγS的反应混合物中。 反应在37℃下进行30分钟，然后加入20mM EDTA终止反应。 为了检测γS-标记的p62蛋白，将反应产物在室温下用2.5mM PNBM烷基化2小时，并使用抗硫代磷酸酯抗体通过蛋白质印迹分析产物。

细胞实验

• 将Huh7人肝细胞在含有10％FBS，100单位/ mL青霉素和100μg/ mL链霉素的高葡萄糖DMEM中于37℃，95％空气/ 5％CO 2气氛中培养。 用或不用依泽替米贝（10μM，1小时）处理肝细胞，并与棕榈酸（PA，0.5mM，24小时）一起温育。

动物实验

• 老鼠
• 使用10周龄的C57BL / 6J雄性小鼠。将这些动物随机分配到三组中的一组（每组7-10只小鼠）：正常食物; MCD饮食，载体治疗;或MCD饮食，依泽替米贝治疗。小鼠可自由饮食和饮水，温度保持在23±2℃，湿度为60％±10％，12小时光照/黑暗循环。在含有依泽替米贝组的MCD饮食中，通过口服强饲法每天一次给予依泽替米贝10mg / kg，持续4周。具有赋形剂组的食物和MCD饮食接受相同体积的磷酸盐缓冲盐水口服4周。在治疗期间每周测量一次体重。 4周后，将小鼠麻醉并杀死;通过心脏穿刺收集血液。收获组织并在液氮中快速冷冻并储存在-70℃或固定在福尔马林中并包埋在石蜡中。
• 大鼠
• 使用雄性OLETF（n = 11）和年龄匹配的LETO大鼠（n = 3），并且在具有12小时光/暗循环的无特定病原体的设施中进行实验。 OLETF大鼠是代表迟发性高血糖症的模型，并且表现出慢性病程，轻度肥胖和糖尿病的临床发作。动物可以不受限制地获取水和食物。在12周龄时，将大鼠随机化并通过胃管饲法用PBS或依泽替米贝（10mg / kg /天）处理20周。在研究结束时，将大鼠禁食过夜并用腹膜内Zoletil / Rompun麻醉。从腹主动脉收集血液，解剖肝组织，立即在液氮中冷冻，并储存在-80℃直至进一步分析。

Fasudil(HA-1077)是一种有效的、具有选择性的Rho抑制剂（ROCK2, Ki=0.33 μM），同时对PKA、PKG、PKC和MLCK也具有抑制活性，Ki值分别为1.6 μM、1.6 μM、3.3 μM、36 μM。

靶点

体外研究

Fasudil是一类钙离子拮抗剂。Fasudil竞争性抑制Ca2+诱导的去极化兔主动脉收缩。Fasudil 抑制对KCl, phenylephnne (PHE) 和前列腺素(PG)F2a的收缩反应。Fasudil也具有血管扩张的作用，通过抑制螺旋条收缩诱导的5-羟色胺，去甲肾上腺素，组胺，血管紧张素，和多巴胺。Fasudil诱导肌动蛋白纤维解体，且抑制细胞迁移。Fasudil抑制肝星状细胞的扩散，应力纤维的形成，和α-SMA的表达，且抑制细胞生长，但不诱导细胞凋亡。Fasudil 抑制LPA诱导的 ERK1/2, JNK 和 p38 MAPK磷酸化

体内研究

Fasudil按30 μg剂量通过冠状动脉内注射给药实验狗，CBF提高约50％。Fasudil (0.01, 0.03, 0.1 和 0.3 mg/kg,静脉注射)降低MBP，提高 HR, VBF, CBF, RBF, 和FBF，这种作用具有剂量依赖性。总剂量为1.0 ng/mL的 Fasudil提高心脏的输出量。Fasudil静脉注射处理实验狗，显著降低MBP，左心室收缩压，和总外周阻力，提高HR和心脏输出量，而右心房压力，dP/dt 和左心室每分钟所做的功没有显著变化。在缺血性损伤的情况下，Fasudil处理，对心血管疾病具有保护作用，且降低JNK的激活，抑制线粒体AIF核易位。Fasudil每天按100 mg/kg剂量口服给药对PLP p139-151免疫的SJL/J小鼠，显着降低发病率和EAE临床评分的平均最高值。Fasudil处理小鼠，抑制脾细胞对抗原的增殖反应。Fasudil口服给药小鼠，可减轻炎症，和脱髓鞘作用。

cAMP依赖性蛋白激酶活性检测

在含50mM Tris-HCl（pH7.0），10mM醋酸镁，2mM EGTA，有或无1μM cAMP，3.3到20μM[r-32P] ATP (4×105 c.p.m.)，0.5μg酶，100μg的组蛋白 H2B 和化合物的反应混合物(终体积为0.2 mL)中进行cAMP依赖性蛋白激酶活性分析。反应混合物在 30°C下温育 5分钟。加入500 μg 牛血清白蛋白作为载体蛋白后，加入1mL冰冻的20%三氯乙酸终止反应。样品在3000 r.p.m.转速下离心15分钟，将沉淀再悬浮于冰冷的10％三氯乙酸溶液中，离心再悬浮循环重复三次。最终的沉淀溶解在1 mL 1N NaOH中，使用液体闪烁计数器测量放射性

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

3.0504 mL

15.2518 mL

30.5036 mL

5 mM

0.6101 mL

3.0504 mL

6.1007 mL

10 mM

0.3050 mL

1.5252 mL

3.0504 mL

50 mM

0.0610 mL

0.3050 mL

0.6101 mL