TESTS

SPECIFICATIONS

Appearance

Orange-red crystalline powder

Identification 

HNMR＆UV

Solubility

10mg/ml water,clear

pH

4.5~5.5

Purity(HPLC)

≥98%

埃博霉素A

MB5538

埃博霉素B；帕土匹龙

MB1821

埃博霉素D

埃博霉素 D  Epothilone D 是一种有效的微管 (microtubule) 稳定剂。

靶点

Microtubule/Tubulin

体外研究

Epothilone D (KOS-862)是一种比Epothilone a或b更有效的体外微管稳定剂。在体外，Epothilone D在一组人类肿瘤细胞系中显示出了强大的细胞毒性，效力与紫杉醇相似。Epothilone D在耐药细胞系中也明显优于紫杉醇，并保留了其对过表达p -糖蛋白[1]的多药耐药细胞系的细胞毒性。Epothilone D (EpoD)是一种微管(MTs)稳定剂。

体内研究

为了评估埃坡霉素D（EpoD）是否改善PS19小鼠中的MT和轴突功能，每组腹膜内注射3个月大的雄性PS19小鼠。注射载体或埃坡霉素D（1 mg / kg或3 mg / kg）共3个月。此外，3个月大的非Tg同窝仔畜接受3mg / kg埃坡霉素D或载体。 3mg / kg埃坡霉素D剂量相当于II期临床研究中使用的剂量的约10倍，其应当最小化在人受试者中用MT稳定药物观察到的中性粒细胞减少症等副作用。接受埃坡霉素D的PS19和WT小鼠未显示出药物不耐受的迹象。实际上，所有药物处理的小鼠都显示出与载体处理的动物无法区分的体重增加。同样地，相对器官重量在载体和埃坡霉素D处理的小鼠中相似。使用标准旋转棒测试评估埃博霉素D-处理的小鼠的运动表现与媒介物处理的群组没有显着差异。最后，尽管存在较小的组间变异性，但在任何治疗组之间白细胞计数或中性粒细胞含量没有显着差异。因此，在这些研究中使用的低剂量的埃坡霉素D似乎具有良好的耐受性。

埃博霉素A

MB5538

埃博霉素B；帕土匹龙

MB6782

埃博霉素C

MB5056

伊沙匹隆；Azaepothilone B

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.0338 mL

10.1692 mL

20.3384 mL

5 mM

0.4068 mL

2.0338 mL

4.0677 mL

10 mM

0.2034 mL

1.0169 mL

2.0338 mL

埃坡霉素D（EpoD）在100％DMSO中并用盐水或PBS（小鼠）稀释 
小鼠 
小鼠组（n = 3）接收腹膜内（腹膜内）的3.7毫克注射/ kg的EPOD的溶解在100％DMSO中，随后在安乐死的时间范围从0.25小时至24小时使用批准。在另一项研究中，小鼠组（n = 3）在100％DMSO中接受3mg / kg的epoD注射，然后在4,6和10天后安乐死。使用LC-MS / MS方案测定脑和血液样品中的epoD水平。每周腹膜内施用组（n = 10-13）的3个月大的PS19 tau Tg小鼠或3个月大的非Tg同窝小鼠。注射1mg / kg epoD，3mg / kg epoD或载体（DMSO），共3个月。监测动物的异常行为或窘迫的迹象，并每周称重。在最后给药后，小鼠进行运动功能和认知测试。安乐死后，恢复大脑和视神经（ON）用于免疫组织化学分析。来自每组的一组小鼠也进行尸检评估，记录器官重量。

Epoxomicin是一种选择性蛋白酶体抑制剂，具有抗炎活性，首要抑制20S蛋白酶体的CH-L活性，也抑制T-L和PGPH催化活性。

特性

Epoxomicin是从Actinomycetes物种中分离的天然产物。

靶点

20S proteasome

体外研究

Epoxomicin共价结合到LMP7, X, MECL1，和蛋白酶体的Z催化亚基。Epoxomicin (100 nM)处理HUVECs，使p53蛋白水平增加30倍。Epoxomicin (10 μM)作用于HeLa细胞，导致泛素化蛋白累积。Epoxomicin(10 μM)作用于HeLa细胞，抑制IκBα降解。Epoxomicin(10 μM)作用于HeLa细胞，显著降低TNF-α刺激的NF-κB DNA结合活性，这种作用存在剂量依赖性。Epoxomicin抑制EL4 淋巴瘤细胞增殖，IC50为4 nM。Epoxomicin(1 μM) 降低LCMV GP33和增强 GP276。Epoxomicin 抑制Babesia bigemina生长，IC50为4 nM。Epoxomicin按0.5 mg/kg和0.05 mg/kg剂量处理B. microti，虫血症峰值分别为34.8% 和42.3%。Epoxomicin (100 nM)处理Plasmodium falciparum，降低78%, 86% 和77%虫血症。Epoxomicin (10 μM) 抑制配子和小配子形成按蚊的卵囊。

体内研究

Epoxomicin 每天按0.58 mg/kg剂量处理，与空白对照组小鼠相比，降低44% CS反应。Epoxomicin (2.9 mg/kg)处理小鼠，24小时后，测量耳肿胀，有效地抑制95％刺激性相关的炎症反应。

PSI(蛋白酶体抑制剂);Proteasome Inhibitor 1

MB5137

MG132,蛋白酶体抑制剂

MB1644

Carfilzomib/PR171

MB3702

MLN9708

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.8027 mL

9.0136 mL

18.0271 mL

5 mM

0.3605 mL

1.8027 mL

3.6054 mL

10 mM

0.1803 mL

0.9014 mL

1.8027 mL

50 mM

0.0361 mL

0.1803 mL

0.3605 mL

• Animal Models: BALB/c小鼠
• Formulation: 10% DMSO/PBS
• Dosages: 2.9 mg/kg
• Administration: 腹腔注射

Eprosartan是一种非肽类血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂，在大鼠血管平滑肌细胞中，[3H]-eprosartan与AT1受体结合，KD为0.83 nM。

特性

对AT1受体的选择性至少高于对AT21受体选择性的1,000-10,000倍。

靶点

体外研究

Eprosartan作用于人体组织（肾上腺皮质，肝脏，克隆AT1受体）和大鼠组织（如肠系膜动脉绑定，肾上腺皮质，肾小球），抑制[125I]-血管紧张素Ⅱ的结合，其对应的IC50分别为1.4 nM 到3.9 nM和1.5 nM 到9.2 nM。Eprosartan (100 nM)，非AT2受体拮抗剂，作用于兔离体灌注近曲小管，完全阻断血管紧张素II诱导的等渗液体吸收。

体内研究

Eprosartan (3 mg/kg-10 mg/kg,通过十二指肠或胃管给药)作用于清醒的血压正常的大鼠，产生剂量依赖性的抑制血管紧张素II的升压反应。Eprosartan (10 mg/kg)作用于肾素依赖性高血压大鼠，可持续1.5小时剂量依赖性地降低血压和抗高血压活性。Eprosartan (60 mg/kg/day,腹腔注射)作用于大鼠18周后，对应零死亡率（20只鼠中零死亡率），而对照组的20只小鼠从第9周开始死亡率为100%。Eprosartan (10 mg/kg)作用于狗，剂量依赖性地降低平均动脉压，不会引起反射性心动过速。Eprosartan (0.3 mg/kg)作用于毁脑脊髓大鼠，抑制电刺激脊髓诱导的升压反应。Eprosartan作用于大鼠，抑制氨基酸诱导的肾小球滤过作用。Eprosartan (0.3 mg/kg i.v.) 作用于毁脑脊髓大鼠，抑制以类似所观察到的肽拮抗剂，SAR1，Ile8[血管紧张素Ⅱ]的方式由脊髓刺激诱导的升压反应。Eprosartan相对于其他化学性质不同的非肽类血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂，可更有效地抑制交感神经系统的活性。

AT1A，血管紧张素Ⅱ受体（225-237）

MB10689

血管紧张素Ⅱ底物

MB5078

PD123319

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.9208 mL

9.6039 mL

19.2079 mL

5 mM

0.3842 mL

1.9208 mL

3.8416 mL

10 mM

0.1921 mL

0.9604 mL

1.9208 mL

50 mM

0.0384 mL

0.1921 mL

0.3842 mL

EPZ005687是一种有效的，选择性EZH2抑制剂，无细胞试验中Ki为24 nM，比作用于EZH1选择性高50倍，比作用于15种其他蛋白甲基转移酶选择性高500倍。

靶点

体外研究

EPZ005687抑制PRC2酶活性，这种作用具有浓度依赖性，IC50为54 nM。EPZ005687直接抑制PRC2酶活性，不通过破坏PRC2亚基之间的蛋白-蛋白相互作用而发挥功能。EPZ005687结合到EZH2 SET结构域的SAM口袋，是SAM竞争性的EZH2酶活性抑制剂。EPZ005687作用于含野生型和Tyr641突变型EZH2的PRC2复合体的亲和力是相似的（在2倍的范围内），而作用于A677G突变体酶则具有更显著的较高亲和力（5.4倍）。EPZ005687作用于多种不同的淋巴瘤细胞，减少H3K27甲基化。对含杂合Tyr641或Ala677突变型细胞具有强大的杀伤力，对野生型细胞增殖的影响最低。EPZ005687增加了细胞周期的G1期，相应地，降低S及G2/M期。EPZ005687作用于Tyr641突变的淋巴瘤细胞系，使已知的EZH2靶基因脱抑制，且影响EZH2 Tyr641突变特异性抑制的基因。

EPZ6438

MB4407

GSK126

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.8530 mL

9.2649 mL

18.5298 mL

5 mM

–

–

–

10 mM

–

–

–

50 mM

–

–

–

生化酶学检验:
化合物与每孔40 μL 5 nM PRC2(50 μL中的实验终浓度为4 nM ) 在1X实验缓冲液(20 mM Bicine [pH 7.6], 0.002% Tween-20, 0.005% Bovine Skin Gelatin 和 0.5 mM DTT)中温育30分钟。每孔10 μL底物混合物包括实验缓冲液3H-SAM，未标记的SAM，加入代表组蛋白H3残基21-44的肽（包含C-末端生物素，附加到C-末端酰胺封端的赖氨酸上），开始反应，终反应混合物中的每种底物都处于其各自的Km值，这种实验形式被称为“平衡条件”。终浓度底物与每组酶反应指定的甲基化状态的底物肽在室温下温育90分钟，然后每孔使用10 μL 600 μM 未标记的SAM淬灭，然后转移到384孔闪光板上，30分钟后进行洗涤。

细胞实验：

• Cell lines: OCI-LY19, WSU-DLCL2, Pfeiffer
• Concentrations: ~10 μM
• Incubation Time: 11 天
• Method: 根据线性对数期生长，测定每组细胞的接种密度。进行细胞计数，实验第4和7天，在含EPZ005687的新鲜培养基中，细胞分裂回原来的接种密度。

Pinometostat (EPZ5676)是一种蛋白甲基转移酶DOT1L的S-腺苷甲硫氨酸(SAM)竞争性抑制剂，无细胞试验中Ki为80 pM，比作用于所有其他测试的PMTs选择性高37000倍以上，抑制肿瘤中H3K79甲基化。

靶点

体外研究

EPZ-5676减少了MV4-11细胞中H3K79双甲基化，IC50是2.6 nM。EPZ-5676浓度和时间依赖性降低H3K79甲基化，而对其他组蛋白位点无作用，这导致在MLL重排的白血病细胞中抑制的关键靶的MLL基因并选择性的凋亡细胞杀伤。EPZ-5676抑制MLL-AF4重新排列细胞系MV4-11的增殖，IC50为9 nM。

体内研究

在MLL重排的白血病异种移植模型中，EPZ-5676连续静脉滴注21天后导致剂量依赖性的抗肿瘤活性。在最高剂量为70.5毫克/公斤/天时，肿瘤完全消退后治疗停止，长达32天都没有肿瘤再生长。在EPZ-5676治疗的大鼠中，无显著体重减轻或明显毒性出现。

GSK126

MB3680

RG108

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.7771 mL

8.8856 mL

17.7711 mL

5 mM

0.3554 mL

1.7771 mL

3.5542 mL

10 mM

0.1777 mL

0.8886 mL

1.7771 mL

50 mM

0.0355 mL

0.1777 mL

0.3554 mL

Tazemetostat (EPZ-6438)是一种有效的，选择性EZH2抑制剂，无细胞试验中Ki 和 IC50分别为2.5 nM 和 11 nM，比作用于EZH1选择性高35倍，比作用于14种其他HMT选择性高4500多倍。

特性

口服生物可利用的野生型和突变型EZH2选择性抑制剂。目前处于临床Ⅱ期试验，用于治疗弥漫性大B细胞性淋巴瘤。

靶点

体外研究

EPZ-6438浓度依赖性降低野生型或SMARCB1突变细胞中总体H3K27Me3水平，并引起去除SMARCB1的MRT细胞系中强的抗增殖作用， IC50范围为32 nM 到 1000 nM。EPZ-6438引起神经元分化的基因表达和细胞周期抑制，同时抑制Hedgehog通路基因，MYC 和 EZH2。在几种EZH2突变体淋巴瘤细胞中，EPZ-6438的抗增殖作用被氢化泼尼松或地塞米松增强。

体内研究

皮下注射 G401异种移植物的SCID小鼠体内，EPZ-6438引起肿瘤郁积，并且在给药期间，产生显著的肿瘤生长延迟，而对体重影响较小。

GSK126

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.7460 mL

8.7300 mL

17.4599 mL

5 mM

5 mM

0.3492 mL

1.7460 mL

10 mM

–

–

–

50 mM

–

–

–

生物化学法:
EPZ-6438与5 nM 40微升每孔的PRC2 (50微升中终测试浓度为4 nM ) 在1X试验缓冲液中(20 mM二羟乙甘胺酸 [pH 7.6]，0.002% Tween-20，0.005% Bovine Skin Gelatin 和0.5 mM DTT)培育30分钟。加入10微升每孔的底物混合物，以启动反应(基底以它们各自的Km值存在于最终反应混合物，即以一种被称为“平衡状态”的形式存在），底物混合物由试验缓冲液3 H-SAM，未标记的SAM，和代表包含C端生物素(附加到C端被酰胺包被的赖氨酸) 的组蛋白H3残基21-44的缩氨酸组成。基底的终浓度和基底肽的甲基化状态表明，每个酶反应在室温下培育90分钟，并用10微升每孔600 μM未标记的SAM淬灭，然后转移到384孔闪烁板，30分钟后进行洗涤。

细胞实验

• Cell lines: 突变细胞系(G401，A204，G402，KYM-1)，野生型细胞系(RD，293，SJCRH30)
• Concentrations: ~10 μM
• Incubation Time: 7天
• Method: 对于贴壁细胞系增殖测定法，每个细胞系的镀层密度基于生长曲线(由ATP含量测定)，由超过7天的时间过程来确定。化合物处理的前一天，细胞以一式三份接种于96孔板(进行0–7天)或6孔板(7 天后取代96孔板进行其余部分)。第0天，细胞是未处理的，DMSO处理的，或用起始浓度10 µM，和稀释3倍或4倍的EPZ-6438处理。板在第0天，第4天，第7天使用Cell Titer Glo读数，在第4天重新装满化合物/介质。第7天，将6孔板用胰蛋白酶处理，离心，重新悬浮在新鲜培养基中，通过Vi细胞计数。每种处理的细胞重复三份再以原始密度接种于96孔板中。细胞粘附到板上过夜，在第0天处理细胞。板在第7，11，和14天，使用Cell Titer Glo进行读数，在第11天重新装满化合物/介质。使用三个重复测试的平均值描绘增殖与时间进程的曲线，并计算IC50值。对于细胞周期和细胞凋亡，G401 与 RD细胞重复两份以每平板1 × 106个细胞接种于15-cm培养皿。细胞在1 µM EPZ-6438 下进行培养，总体积为25毫升，时间超过14天，细胞在第4，7，和11天被换为初始密度。细胞周期分析和TUNEL试验通过Guava流式细胞仪，按照生产商方案进行。

动物实验

• Animal Models: 皮下注射G401异种移植物的SCID小鼠。
• Formulation: 0.5% NaCMC 加 0.1% Tween 80 水溶液
• Dosages: ~500毫克/千克
• Administration: 口服给药

Erastin是一种ferroptosis激活剂，通过作用于线粒体VDAC而起作用，选择性作用于携带致癌基因RAS的肿瘤细胞。

靶点

Ferroptosis

体外研究

Erastin选择性致死致癌的Ras突变体细胞系，并触发独特的fe依赖性的称为ferroptosis的非凋亡细胞死亡。Erastin直接结合VDAC2并且使得通过NADH-依赖方式产生ROS导致线粒体损害，在一些表达激活突变的肿瘤细胞中，通过RAS-RAF-MEK途径诱导细胞死亡。此外，erastin通过诱导ROS介导的CID（胱天蛋白酶非依赖性细胞死亡），强烈增强了野生型EGFR细胞的作用。

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.8280 mL

9.1401 mL

18.2802 mL

5 mM

0.3656 mL

1.8280 mL

3.6560 mL

10 mM

0.1828 mL

0.9140 mL

1.8280 mL

50 mM

–

–

–

• Cell lines: BJ-TERT/LT/ST/RASV12细胞
• Concentrations: 5 or 10 μg/mL
• Incubation Time: 6-11小时
• Method: BJ-TERT/LT/ST/RASV12细胞接种在100 mm平皿中，并使其生长过夜。细胞用erastin（5或10微克/毫升）处理6，8，或11小时。camptothecin处理（0.4微克/毫升）的对照被维持，在接种的时候处理20小时。处理后，细胞用胰蛋白酶/EDTA孵育并用含血清的新鲜培养基洗1次，然后用磷酸盐缓冲盐水洗涤两次。细胞同1×结合缓冲液重悬。100 μL重悬细胞在5μL的膜联蛋白V-FITC和碘化丙啶iodiode在黑暗中孵育15分钟。然后加入400 μl的1×结合缓冲液S并用流式细胞仪分析。采集数据，并使用CellQuest软件进行分析。只有不被碘化丙啶染色的活细胞使用FL1通道的膜联蛋白V-FITC染色分析。

TESTS

SPECIFICATIONS

Appearance

White powder

Identification

HNMR

Purity(HPLC)

≥98%