GSK650394是一种血清和糖皮质激素调节的激酶-1抑制剂,对SGK1和SGK2的 IC50分别为62 nM和103 nM。

靶点

体外研究

GSK650394抑制SGK1介导的上皮细胞转运，在SCC试验中IC50为0.6 μM。在LNCaP细胞中，GSK650394抑制雄激素介导的Nedd4-2磷酸化增加和雄激素介导的细胞生长。GSK650394抵消皮质醇诱导的神经再生的减少，Hedgehog信号通路的改变，和GR核转运。GSK 650394通过减弱流感vRNPs转运到A549细胞的细胞质抑制流感病毒的复制。

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.6147 mL

13.0736 mL

26.1472 mL

5 mM

0.5229 mL

2.6147 mL

5.2294 mL

10 mM

0.2615 mL

1.3074 mL

2.6147 mL

50 mM

0.0523 mL

0.2615 mL

0.5229 mL

闪烁迫近分析法 (SPA):
SGK1 S422D(60–431 aa；0.275 μg/mL 终浓度)或SGK2 (0.875 μg/mL终浓度)在缓冲液中被PDK1 (1.1 μg/mL终浓度)激活，在30℃下培养30分钟，缓冲液由50 mM Tris (pH 7.5)，0.1 mM EGTA，0.1 mM EDTA，10 mM MgCl2，0.1% β-巯基乙醇， 1 mg/mL BSA，和ATP (终浓度0.15 mM)组成。SGK2的制备如SGK1，除了其对应的全长蛋白质。包含终浓度为75 μM的生物素化的CROSStide多肽溶液和2×106 cpm的γ32P-ATP在反应缓冲液中制备。在96孔板中，将5 μL GSK650394加入25 μL激活的酶混合物。加入20 μL CROSStide混合物，并在室温下培养1小时。接下来，加入含0.1 M EDTA，pH 8.0的50 μL 25 mg/mL链霉亲和素包被的SPA珠PBS悬浮液。然后将板密封，以2000 rpm离心8分钟，信号以30 sec/well在Packard TopCount NXT 闪烁计数器上检测。GSK650394抑制SGK1 和 SGK2 活性的IC50值通过这些数据使用GraphPad Prism 3软件计算。

细胞实验：

• Cell lines: LNCaP 细胞
• Concentrations: ~10 μM
• Incubation Time: 7天
• Method: LNCaP细胞以5,000细胞每孔的密度接种于96孔板，在100 μL PRF-RPMI 1640中培养，用8% CS-FBS，0.1 mM NEAA，和1 mM NaPyr进行补充。在第三天，通过50 μL PRF-RPMI 1640 取代原培养基，其包含8% CS-FBS，NEAA，NaPyr 和2X 浓度的适当激素/抑制剂，细胞被含有或不含有GSK650394的激素处理。在第5天和第7天，重复处理。在第10天，除去培养基，相对细胞数通过FluoReporter Blue试验根据制造商说明进行测定。

GSK1016790A (GSK101)是一种新型的、有效的TRPV4激活剂，其在人脉络丛上皮细胞中的EC50为34 nM。

靶点

体外研究

在浓度为1 nM以上时，GSK1016790A在表达鼠源和人源TRPV4的HEK细胞中引发钙离子（Ca2+）的流入（EC50分别为18和2.1 nM），引起剂量依赖式的TRPV4全细胞电流的激活。它可以在多种类型细胞中刺激、激活TRPV4，包括内皮细胞、尿路平滑肌细胞、尿道上皮细胞、以及过表达TRPV4的HEK293细胞。GSK1016790A特异性激活TRPV4，引发质膜上该通道的表达下调、快速部分脱敏。

体内研究

GSK1016790A在高肺血管张力的情况下，使全身系统的血管阻力以及肺部血管阻力急剧下降。GSK1016780A激活TRP4，引起血管舒张、渗漏和组织出血。

GSK2193874

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.5253 mL

7.6265 mL

15.2530 mL

5 mM

0.3051 mL

1.5253 mL

3.0506 mL

10 mM

0.1525 mL

0.7626 mL

1.5253 mL

50 mM

0.0305 mL

0.1525 mL

0.3051 mL

• Cell lines: 脉络丛上皮细胞
• Concentrations: 10 nM
• Incubation Time: 20分钟
• Method: 用DMSO、10 nM GSK处理或者预先处理以1 mM HC、再用10 nM GSK处理CPECs（脉络丛上皮细胞）20分钟。处理过后，这些细胞被固定、用Coomassie Brilliant Blue进行染色。

动物实验

• Animal Models: Adult male Sprague-Dawley rats
• Formulation: 1% DMSO, 20% Captisol（溶于生理盐水）
• Dosages: 2, 4, 6, 8, 10, and 12 μg/kg
• Administration: 静脉注射