GSK1059615是双重PI3Kα/β/δ/γ (可逆的)和mTOR抑制剂，IC50分别为0.4 nM/0.6 nM/2 nM/5 nM 和 12 nM。

靶点

PI3Kα

PI3Kβ

PI3Kγ

PI3Kδ

IC50

0.4 nM

0.6 nM

5 nM

2 nM

体外研究

GSK1059615也抑制mTOR，IC50为12 nM。GSK1059615抑制PI3K通路，诱导细胞停滞在G1期，可观察到凋亡。GSK1059615有效作用于胸腺癌细胞。GSK1059615作用于T47D和BT474癌细胞，是PI3K抑制剂，降低细胞内AKT在Ser473位点磷酸化，IC50为40 nM。

体内研究

GSK1059615 作用于携带移植瘤的小鼠，完全抑制肿瘤生长, 且血浆胰岛素水平提高。GSK1059615按25 mg/kg剂量,口服给药BT474 或HCC1954胸腺癌，每天两次，导致瘀血或肿瘤衰退。

特征

GSK1059615是GlaxoSmithKline的第一个PI3K临床化合物。

CUDC-907

MB5316

CZC24832

MB3215

Duvelisib (IPI-145)

MB3886

GDC-0032

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.9998 mL

14.9988 mL

29.9976 mL

5 mM

0.6000 mL

2.9998 mL

5.9995 mL

10 mM

–

–

–

50 mM

–

–

–

激酶实验:
GSK1059615溶于0.1 μL 100% DMSO，然后加384孔板上,但是第6列和第18列不加。GSK1059615从第1列到12列以及从第13列到24列连续稀释，第6列和第18列的孔中仍然只含DMSO，获得11种不同浓度。实验 buffer含MOPS (pH 6.5), CHAPS, 和DTT。PI3Kα和PIP2(L-alpha-D-肌肉-磷脂酰环己六醇4,5-二磷酸[PI(4,5)P2]3-O-二氧磷酸基相连的,D(+)-sn-1,2-di-O-辛酰甘油基)混合，然后在板中和GSK1059615温育30分钟，然后加入P33-ATP 和MgCl2开始反应。没有酶的孔（第18列）作为低对照组。加入溶于 PBS/EDTA/CHAPS 的PEI-PS铅头珠而终止反应，然后板再温育至少1小时（一般情况是温育过夜），然后进行离心。 使用Viewlux检测器测定信号，然后 输入曲线拟合软件用于绘制浓度反应曲线。 根据高对照组 (C1, 0.1 μL DMSO，第6列， A-P行)和低对照组 (C2, 第18列,第A-P行),使用 100*(1-(U1-C2)/(C1-C2))公式计算抑制活性百分数。

细胞实验：

• Cell lines: BT474, HCC1954和T-47D细胞
• Concentrations: 1 μM 左右
• Incubation Time: 72小时
• Method: 培养BT474, HCC1954 和T-47D (人类胸腺细胞)。细胞分到T75 烧瓶中，进行2到3天，然后开始实验，到收集的时候获得70-80% 融合细胞。使用0.25%胰蛋白酶-EDTA获得细胞。使用台酚蓝排除性染色在细胞悬浮液中测定细胞数。细胞接种在384孔黑色平底板上，板上含48 μL 培养基，每孔接种103个细胞，过夜处理。第二天，加入GSK1059615。实验第一天，用CellTiter-Glo处理板，然后测量读数。连续稀释两次的GSK1059615储备在384孔板上。4 μL 稀释液加到105 μL 培养基中, 混合后, 细胞板的每孔中加入2 μL 这种稀释液。DMSO 终浓度为0.15%。细胞温育72小时。然后计数。然后在实验板上加同等体积的CellTiter-Glo试剂。震荡板2分钟，在室温下温育30分钟，然后在Analyst GT 计数板上读取化学发光信号。使用 XLfit 软件绘制剂量反应曲线，测定IC50值。

动物实验：

• Animal Models: 携带BT474 或HCC1954的小鼠
• Formulation: 在溶于水的10% 丙二醇中配制
• Dosages: 25 mg/kg
• Administration: 注射处理

GSK1070916是一种可逆的，ATP竞争性的Aurora B/C抑制剂，IC50为3.5 nM/6.5 nM，比作用于紧密相关的Aurora A-TPX2复合体选择性高100倍以上。

靶点

体外研究

GSK1070916选择性抑制Aurora B和Aurora C，Ki为0.38 nM和1.5 nM，而作用于Aurora A 的Ki为490 nM。Aurora B和Aurora C的抑制是时间依赖性的，酶抑制解离半衰期分别为>480 min和270 min。此外，GSK1070916也是ATP竞争性抑制剂。GSK1070916处理人肿瘤细胞，剂量依赖性抑制Aurora B特异性底物，丝氨酸10上组蛋白H3的磷酸化。此外，GSK1070916抑制肿瘤细胞的增殖，在超过100种广泛肿瘤类型的细胞系中，EC50 <10 nM，中值EC50为8 nM。虽然GSK1070916对增殖细胞具有有效活性，但是效能在原代，不分裂的，正常人血管内皮细胞中显著变化。此外，GSK1070916-处理的细胞不会停滞在有丝分裂期，而使其不能分裂，变为多倍体，最终导致细胞凋亡。在另一项研究中，据报道，高水平染色体数与抗Aurora B与C的抑制相关，表明具有绕开高倍性检查点机制的细胞对GSK1070916耐药。

体内研究

GSK1070916(25，50，或100 mg/kg)在小鼠体内剂量依赖性抑制Aurora B特定底物的磷酸化作用，与其广泛的细胞活性相一致，在10种人肿瘤异种移植模型中，包括乳腺，结肠，和两种白血病模型中具有抗肿瘤作用。

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.9699 mL

9.8497 mL

19.6994 mL

5 mM

0.3940 mL

1.9699 mL

3.9399 mL

10 mM

0.1970 mL

0.9850 mL

1.9699 mL

50 mM

0.0394 mL

0.1970 mL

0.3940 mL

激酶试验:
GSK1070916抑制Aurora酶的能力使用体内激酶试验测量。该试验测量Aurora A，Aurora B 和Aurora C使合成肽底物磷酸化的能力。对于所有3种Aurora激酶，生物素-Ahx-RARRRLSFFFFAKKK-NH2用于Aurora A–TPX2 LEADseekerTM试验，5FAM-PKAtide用于IMAPTM试验。考虑到Aurora酶的时间依赖性抑制，加入底物起始反应前，Aurora A–TPX2，Aurora B–INCENP和Aurora C–INCENP与不同浓度的GSK1070916培养30分钟。对于Aurora A LEADseekerTM试验，终试验浓度为0.5 nM Aurora A–TPX2，1 μM多肽底物，6 mM MgCl2，1.5 μM ATP，含0.003 μCi/μL [γ-33P] ATP的50 mM Hepes，pH 7.2，0.15 mg/mL BSA，0.01% Tween-20，5 mM DTT 和 25 mM KCl。反应在室温(25 °C)下培育120分钟，加入含有LEADseekerTM磁珠和EDTA的PBS(终浓度为2 mg/mL磁珠和25 mM EDTA)终止。然后将板密封，将磁珠静置过夜。形成的产物使用Viewlux 成像仪定量。对于IMAPTM试验，将Aurora A–TPX2 (终浓度1 nM)，Aurora B–INCENP (终浓度2 nM) 或Aurora C–INCENP (终浓度2.5 nM)加入平板中包含0.15 mg/mL BSA，0.01% Tween 20 和 25 mM NaCl 的5 μL缓冲液(对于Aurora A，25 mM Hepes，pH 7.2，对于Aurora B，25 mM Hepes，pH 7.5，对于Aurora C，20 mM Hepes，pH 7.2)中。混合物在室温下培育30分钟。为起始反应，5 μL底物溶液加入包含相同Hepes的缓冲液，25 mM NaCl，MgCl2 (Aurora A, B 和C分别为2, 4 和4 mM)，DTT (Aurora A, B 和C分别为4, 4 和2 mM)，ATP (Aurora A, B 和C分别为4, 4和10 μM)，200 nM 5FAM-PKAtide，0.01% Tween 20和0.15 mg/mL BSA，用于预培养。对于Aurora A 和B，反应在室温下培育120分钟，Aurora C培育60分钟。然后这些反应通过加入10 μL 1:500 (1:600对于Aurora C)渐进结合试剂，即95%渐进结合缓冲液 A 和5%渐进结合缓冲液B终止反应。板在室温下培育大约90–120分钟(允许达到平衡的时间)。板在Molecular Devices Analyst酶标仪上通过荧光偏振模式读取数据。

细胞实验

Cell lines: SW48，Colo 201，SW480，WiDr，Colo205，RKO E6，RKO，LoVo，HCT-116，SW620，HT29，W1417，DLD-1，HCT-8，Colo 320HSR，Hep-3B，OVCAR-3，MEC-1细胞

• Concentrations: 0-15 mM
• Incubation Time: 6-7 天
• Method: 将细胞接种在96孔板推荐的生长培养基中，在37 °C ，5% CO2中培养过夜。第二天，细胞用一系列稀释的GSK1070916处理。此时，一组细胞用CellTiter-Glo处理一段时间，相当于时间为0(T = 0)时测量。用化合物培养6到7天后，细胞增殖使用CellTiter-Glo试剂根据制造商建议的方案测量。Aurora B的抑制诱导核内有丝分裂，作用程度根据细胞类型有所不同，延伸化合物处理时间以精确反映对一大组细胞系的细胞活性的作用。对于细胞活性的分析，减去没有细胞的孔中得到的值，进行背景校正，数据使用Microsoft Excel XLfit4软件以DMSO-处理的对照组样品的百分比绘图。EC50值代表50%最大作用时GSK1070916的浓度。

动物实验

Animal Models: 小鼠肿瘤异种移植模型(A549，SW620，HCT116，H460，MCF-7，HL60，K562，Colo205)

• Formulation: 2% 聚氧乙烯蓖麻油，2% N,N-二甲基乙酰胺，和 96% 酸化水(pH 5.0)
• Dosages: 25，50，或 100 mg/kg
• Administration: 静脉注射给药，每天一次