Flupentixol是一种抗精神病安定药物，是D1 andD2多巴胺受体的强效拮抗剂，也是α肾上腺素能受体的拮抗剂。

体外研究

Flupenthixol具有广泛的受体谱，与多种多巴胺和5-羟色胺结合位点相互作用，这在酒精依赖的神经生物学中是重要的。氟哌噻吨拮抗多巴胺受体在一些受体亚型的结合，主要在D1、D2、D3和D4受体上具有较少的亲和力，并且还影响5-HT2A和5-HT2C受体的5-羟色胺结合以及α1-肾上腺素能受体的去甲肾上腺素结合。

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.9707 mL

9.8534 mL

19.7068 mL

5 mM

0.3941 mL

1.9707 mL

3.9414 mL

10 mM

0.1971 mL

0.9853 mL

1.9707 mL

50 mM

0.0394 mL

0.1971 mL

0.3941 mL

Foretinib (GSK1363089)是一种ATP竞争性的HGFR和VEGFR抑制剂，对Met和KDR作用最强，在无细胞试验中IC50分别为0.4 nM和0.9 nM。对Ron， Flt-1/3/4， Kit， PDGFRα/β和Tie-2作用效果稍弱，对FGFR1和EGFR几乎没有抑制活性。

靶点

体外研究

XL880抑制HGF受体家族酪氨酸激酶，对Met和Ron 的IC50 值分别为0.4 nM和3 nM。XL880也会抑制KDR，Flt-1，和Flt-4，IC50值分别为0.9 nM，6.8 nM和2.8 nM。XL880抑制B16F10，A549 和HT29细胞集落生长，IC50分别为40 nM，29 nM和165 nM。一项最近的研究表明，XL880差异性影响胃癌细胞系MKN-45和KATO-III的细胞生长。XL880抑制MKN-45细胞中MET和下游信号分子的磷酸化，而在KATO-III细胞中靶向作用于GFGR2。

体内研究

XL880(100 mg/kg，单一剂量，口服强喂)很大程度上抑制B16F10肿瘤Met的磷酸化和配体(比如，HGFor VEGF)诱导的肝脏中Met和肺中Flk-1/KDR受体磷酸化，两者都能持续24小时。XL880 (30-100 mg/kg，每天一次，口服强喂)处理导致肿瘤负荷减少。30和100 mg/kg XL880处理后，肺表面肿瘤负荷分别减少50%和58%。XL880处理负荷B16F10实体瘤的小鼠也会导致剂量依赖性肿瘤生长抑制，30和100 mg/kg分别导致64%和87%的抑制。对于这两项研究，XL880给药具有良好的耐受性，并且没有显著的体重损失。XL880通过Met可以进一步以HGF的反常信号为作用靶点，同时靶向作用于几个参与肿瘤血管生成的受体酪氨酸激酶。XL880给药2到4小时后，引起人异种移植物中肿瘤出血坏死，96小时(给药5天后)观察到最大肿瘤坏死，导致完全的肿瘤消退。

ZM306416

MB3992

瓦他拉尼(PTK787 ) 2HCl

MB2944

瓦特拉尼碱

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.5807 mL

7.9033 mL

15.8065 mL

5 mM

0.3161 mL

1.5807 mL

3.1613 mL

10 mM

0.1581 mL

0.7903 mL

1.5807 mL

50 mM

0.0316 mL

0.1581 mL

0.3161 mL

激酶抑制试验:
激酶抑制使用三种测定形式中的一种进行研究：[33P]磷酰基转移法，荧光素酶耦合的化学发光法，或AlphaScreen酪氨酸激酶技术。IC50s使用XLFit通过非线性回归分析计算。33P-磷酰基转移激酶实验反应在384孔白色，透明底，高结合力微量滴定板(Greiner，Monroe，NC)中进行。板用50 μL体积的涂层缓冲液中的2 μg/well蛋白质或多肽底物涂覆，涂层缓冲液包含40 μg/mL底物(poly(Glu, Tyr) 4:1，22.5 mM Na2CO3，27.5 mM NaHCO3，50 mM NaCl 和3 mM NaN 3。涂层的板用50 μL实验缓冲液洗涤一次，然后在室温下(RT)过夜培养。测试化合物和酶与33P-γ-ATP (3.3 μCi/nmol)结合，总体积为20 μL。反应混合物在室温下培养2小时，然后通过抽吸终止。随后微量滴定板用0.05% Tween-PBS缓冲液(PBST)清洗6次。加入闪烁液(50 μL/well)，整合的33P使用MicroBeta闪烁计数器通过液体闪烁光谱法测量。荧光素酶耦合的化学发光反应在384孔白色，含培养基的微量滴定板(Greiner)中进行。第一步，酶和化合物结合，并培养60分钟；加入终体积为20 μL的ATP与多肽底物(poly(Glu, Tyr) 4:1)起始反应，在室温下培养2-4小时。接下来进行激酶反应，加入20 μL等分激酶Glo (Promega，Madison，WI)，荧光信号使用Victor酶标仪测量。总ATP消耗限制在50%。AlphaScreenTM酪氨酸激酶测定使用链霉亲和素涂覆的供体珠和PY100抗磷酸酪氨酸抗体涂覆的受体珠进行。生物素化的聚(Glu,Tyr) 4:1用作底物。通过加入供体/受体珠，随后形成供体/受体珠复合物产生荧光测量底物磷酸化。激酶与测试化合物结合，并预培养60分钟，随后加入总体积为20 μL 的ATP，和生物素化的聚(Glu, Tyr)在384孔白色，含培养基的微量滴定板(Greiner)中。反应混合物在室温下培养1小时。然后加入包含75 mM Hepes，pH 7.4，300 mM NaCl，120 mM EDTA，0.3% BSA和0.03% Tween-20的10 μL 15-30 μg/mL AlphaScreen 珠悬浮液淬灭反应。室温下培养2-16小时后，板使用AlphaQuest阅读器读取数据。

细胞实验

• Cell lines: B16F10，A549，和 HT29 细胞
• Concentrations: 40 nM
• Incubation Time: 12 到 14 天
• Method: B16F10，A549，和HT29细胞(1.2×103/孔)与软琼脂混合，并接种于包含超过琼脂层的10% FBS 和EXEL-2880的96孔板。对于含氧量正常的条件，板在21%氧气，5% CO2，和74% 氮气中培养(37 ℃)12到14天，而低氧条件下的培养(37℃)在1% 氧气，5% CO2，和94%氮气的低氧培养室中进行。每个条件下的集落数量在加入50% Alamar Blue，进行荧光检测后评估。

动物实验

• Animal Models: B16F10 肿瘤细胞(2×10 5)通过胃部静脉注射植入5到8周大的无胸腺裸鼠(NCr 或 BALB/c)
• Formulation: 0.9% 生理盐水
• Dosages: 100 mg/kg
• Administration: 口服强饲

Forskolin在各种各样细胞类型中，是一种普遍存在的真核细胞腺苷酸环化酶（AC）激活剂，在细胞生理学研究中，通常用来提高cAMP水平。

靶点

体外研究

Forskolin可以使膜，细胞或组织制备液中cAMP含量上升。Forskolin 不仅可以活化AC 而且可以与某些其它蛋白相互作用，包括葡萄糖转运蛋白和离子通道。Forskolin能够促进9种不同独立AC形式的活化，虽然对AC9效率有点低，这可以用于提供一种鉴定和量化G蛋白 (Gs)–AC复合物高亲和性结合位点的方法。G蛋白偶联受体活化G蛋白有助于细胞中Forskolin刺激的cAMP 产生，因为 G蛋白-Forskolin对AC活性有增强作用。Forskolin在不与细胞表面受体相互作用前提下刺激腺苷酸环化酶活性。在脂肪细胞中Forskolin’s促进 cAMP产生进而可以抑制嗜碱性粒细胞和肥大细胞脱颗粒作用以及组胺释放，降低血压、眼内压，抑制血小板聚集，促进血管舒张，支气管扩张和甲状腺激素分泌，刺激脂肪分解。Forskolin 抑制血小板活化因子 (PAF)的结合, 这种抑制不依赖于cAMP形成可能是 Forskolin’s 直接作用于 PAF或者通过干扰PAF与它的受体结合实现的。Forskolin似乎对多种膜转运蛋白也有效果并且可以抑制脂肪细胞，红细胞，血小板，和其他细胞中的葡萄糖运输。Forskolin也被用于治疗青光眼。

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.4361 mL

12.1803 mL

24.3605 mL

5 mM

0.4872 mL

2.4361 mL

4.8721 mL

10 mM

0.2436 mL

1.2180 mL

2.4361 mL

50 mM

0.0487 mL

0.2436 mL

0.4872 mL

Fosaprepitant dimeglumine salt是一种水溶性的阿瑞匹坦（aprepitant）磷酰基前体药物，是一种NK1拮抗剂。

靶点

体外研究

Fosaprepitant (MK-0517, L-758,298)是一种aprepitant的磷酰基前药。Aprepitant是一种选择性P物质(NK-1 受体)拮抗剂，被批准用作与皮质类固醇和 5-HT 3受体拮抗剂的联合疗法，以预防急性和延迟化疗诱导的恶心和呕吐。

体内研究

Fosaprepitant静脉内给药30分钟内通过常见磷酸酶的作用转化为aprepitant。Fosaprepitant在高达150 mg (1 mg/ml)剂量下耐受性良好，Fosaprepitant 115 mg在其AUC中生物等效于aprepitant 125 mg。Fosaprepitant 115 mg已经被提交到FDA，作为aprepitant口服给药3天疗程里第1天代替给药，aprepitant在第2和第3天口服给药。

阿瑞吡坦;阿瑞匹坦

MB4214

奈妥吡坦

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

0.9952 mL

4.9760 mL

9.9519 mL

5 mM

0.1990 mL

0.9952 mL

1.9904 mL

10 mM

0.0995 mL

0.4976 mL

0.9952 mL

50 mM

0.0199 mL

0.0995 mL

0.1990 mL

产品描述

Fosbretabulin (Combretastatin A4 Phosphate (CA4P)) Disodium是水溶性的Combretastatin A4 (CA4)前药，CA4靶向作用于microtubule从而与β-微管蛋白结合，无细胞试验中Kd为0.4 μM。Fosbretabulin Disodium抑制微管蛋白聚合，IC50为2.4 μM，也会干扰肿瘤血管。

特性

A microtubule associated inhibitor with higher affinity to β-tubulin vs. Colchicine. Best for advanced solid tumors, anaplastic thyroid cancer, & choroidal neovascularization.

靶点

体外研究

Fosbretabulin disodium (Combretastatin A-4 phosphate disodium, CA4P disodium)是 Combretastatin A4 (CA4)的水溶性前体药物, 靶向作用于microtubule，最初是从非洲树Combretum caffrum中分离得到的。CA4是微管蛋白结合剂，结合或靠近到β-微管蛋白的秋水仙素结合位点(Kd= 0.40 μM)，抑制微管蛋白装配，IC50为2.4 μM。CA4对增殖的内皮细胞而非休眠的内皮细胞具有细胞毒性，对肿瘤血管具有强效的，选择性的毒性。CA4P（1 mM，30分钟）破坏内皮细胞微管骨架，并介导内皮细胞的形态变化。CA4P刺激肌动蛋白应力纤维的形成和膜出泡，且通过Rho/ Rho激酶提高单层通透性。CA4P提高内皮细胞通透性，主要通过干VE-cadherin/β-catenin/Akt信号通路，而抑制内皮细胞迁移和毛细管形成，从而导致快速的血管性虚脱和肿瘤坏死。

体内研究

CA4P按10％的最大耐受剂量（MTD）单独给药处理实验性肿瘤模型，导致快速的，广泛的，不可逆的血管关闭。CA4P 处理6小时后，血管容积下降93%。CA4P按100 mg/kg剂量处理6小时后，肿瘤血降低约100倍，脾中降低约7倍。

激酶实验

微管蛋白装配-拆卸:

·      从微管分离的微管蛋白的组装在350nm下通过分光光度法进行，且利用浊度增加，这是与微管形成相关。温度从10°C提升到35°C组装开始。药物促进光吸收。药物溶解于DMSO(<4%)，从而不影响对照组装。

细胞实验

·         Cell lines: HUVECs

·         Concentrations: ~50 nM

·         Incubation Time: 12-48小时

·         Method:

增殖实验中，FBS在X-VIVO培养基中稀释到最低浓度（1%），以便使内皮细胞有足够的生存能力。分离后，细胞按2×104HUVECs浓度接种到24孔板中，粘附过夜，在有或无细胞因子(5 ng/ml FGF-2 或 5 ng/ml VEGF-A)的情况下继续培养。添加0-50 nMCA4P。温育12，24，36，和48小时后，使用胰蛋白酶/ EDTA分离细胞，通过台酚蓝染色排除法进行手工计数。

动物实验

·         Animal Models: 含移植瘤的BD9大鼠

·         Formulation: 含有几滴5% Na2CO3的0.9％的生理盐水

·         Dosages: 100 mg/kg, 3 ml/kg

·         Administration: 腹腔注射

R788 (Fostamatinib)是活性代谢产物R406的前体药物, 是Syk抑制剂，IC50为41 nM,强抑制 Syk但不抑制Lyn,对 Flt3作用效果低5倍。

靶点

Syk

Adenosine A3 receptor

Adenosine transporter

Monoamine transporter

IC50

41 nM

81 nM

1.84 μM

2.74 μM

体外研究

R788是脾酪氨酸激酶(Syk)抑制剂R406的前药。R788是一种ATP结合的竞争性抑制，Ki为30 nM。R788剂量依赖性抑制抗- IgE介导的CHMC脱粒，EC50 为56 nM。R788也会抑制抗-IgE诱导的LTC4，细胞因子以及趋化因子，包括TNFα，IL-8，和GM-CSF的产生与释放。R788对Syk的抑制导致Syk信号下游所有磷酸化作用被抑制。CHMC中在FcϵRI信号之后，R788主要抑制IL-4和IL-2受体信号。在人肥大细胞，巨噬细胞，和中性粒细胞中，R788特异性抑制FcγR信号。R788能够抑制免疫复合物介导的局部炎症损伤。R788诱导大部分受检DLBCL细胞系的凋亡。在R788敏感性DLBCL细胞系，R788特异性抑制刺激和配体诱导的BCR信号(SYK525/526自身磷酸化和SYK依赖性B细胞连接蛋白[BLNK]磷酸化)。

体内研究

在逆转-被动阿瑟斯反应和双抗体诱导的关节炎模型中，R788对小鼠口服给药减少免疫复合物介导的炎症。在另一项研究中，R788有效抑制体内BCR信号，导致恶性B细胞的增殖和存活减少，并显著延长治疗组动物的存活。在风湿性关节炎模型中，R788显著减少主要炎症介质，比如TNFalpha，IL-1，IL-6和IL-18，从而减少炎症和骨退化。

特征

在体内转化为其活性代谢物R406。

R406

MB3962

R406 (free base)

MB3963

R788 (Fostamatinib) Disodium

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.7228 mL

8.6139 mL

17.2277 mL

5 mM

0.3446 mL

1.7228 mL

3.4455 mL

10 mM

0.1723 mL

0.8614 mL

1.7228 mL

50 mM

0.0345 mL

0.1723 mL

0.3446 mL

荧光偏振激酶试验和Ki测定:
进行荧光偏振反应。对于Ki测定， 200-μL的反应重复两份以8个不同ATP浓度(从200 μM开始，2倍连续稀释)，在DMSO或125，62.5，31.25，15.5，或7.8 nM浓度的R788存在下建立。在不同时间点，移除每个反应的20 μL反应混合物，并淬灭停止反应。对于每个浓度的R788，测定每个浓度下的ATP反应速率，并对ATP浓度作图，以测定表观Km 和Vmax (最大速率)。最终，表观Km (或表观Ki/Vmax)对抑制剂浓度作图，以测定Ki。

细胞实验

• Cell lines: 培养的人肥大细胞(CHMC)
• Concentrations: 0 μM -100 μM
• Incubation Time: 30分钟
• Method: 培养的人肥大细胞(CHMC)衍生自脐带血CD34+祖细胞，并在增补的培养液中生长，待发，并刺激。在刺激前，细胞用R788 或DMSO培养30分钟。然后细胞用0.25到2 mg/mL 抗-IgE或抗-IgG 或2 μM离子霉素刺激。对于类胰蛋白酶测定，细胞以∼1500/孔在改良的Tyrode缓冲液中刺激30分钟。对于LTC4和细胞因子的产生，以100,000细胞/孔分别刺激1小时或7小时。类胰蛋白酶活性通过多肽底物的荧光读出，LTC4和细胞因子使用Luminex多重技术测量。

动物实验

• Animal Models: 患有关节炎的 Balb/c 小鼠
• Formulation: 35% TPGS，60% PEG 400，5% 丙二醇
• Dosages: 1 mg/kg 或 5 mg/kg
• Administration: 口服，每日两次