Pazopanib HCl (GW786034 HCl)是一种新型多靶点抑制剂，作用于VEGFR1，VEGFR2，VEGFR3，PDGFR，FGFR，c-Kit和c-fms，在无细胞试验中IC50分别是10 nM，30 nM，47 nM，84 nM，74 nM，140 nM和146 nM。

特性

Pazopanib是一个多激酶的抑制剂。

靶点

体外研究

在HUVEC细胞中，Pazopanib显著抑制VEGF诱导的VEGFR-2的磷酸化，IC50 为8nM。 在所有滑膜肉瘤细胞系中Pazopanib都表现出了生长抑制作用，包括SYO-1和HS-SY-II细胞，这种抑制具有剂量依赖的特性。1µg/mL Pazopanib就可以抑制SYO-1和HS-SY-II细胞增殖，而5µg/mL Pazopanib可以让它们的增殖彻底受阻。 Pazopanib 会诱导滑膜肉瘤细胞周期停留在 G1期从而抑制它的生长。与对照的细胞相比，经过Pazopanib处理过的 SYO-1细胞中的AKTs, GSK-3β, JNKs, p70 S6激酶以及mTOR的磷酸化都受到了抑制。在20 mg/mL 到 22.5 mg/mL的浓度之间，Pazopanib 使RPE细胞的生存能力逐渐下降。

体内研究

与没有经过Pazopanib或者仅用10 mg/kg的Pazopanib治疗的小鼠相比，经过30 mg/kg或者100 mg/kg Pazopanib治疗的小鼠其肿瘤症状明显减轻。Pazopanib治疗耐受性良好，各组小鼠之间体重没有发生明显差异]。

帕唑帕尼

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.1098 mL

10.5490 mL

21.0979 mL

5 mM

0.4220 mL

2.1098 mL

4.2196 mL

10 mM

0.2110 mL

1.0549 mL

2.1098 mL

50 mM

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激酶活性测定:
通过杆状病毒表达系统纯化人源的VEGFR受体激酶1, 2和3的C端催化活性区域的GST融合蛋白，用这些蛋白在384孔微量滴定板上利用均相时间分辨荧光技术(HTRF)对VEGRF1,2和3的酶活性进行分析。首先将10 μL活化的VEGFR2激酶溶液[终浓度为1nM酶溶于0.1 M HEPES，pH 7.5,包含0.1 mg/mL BSA，300 μM DTT]加入10μL底物溶液[终浓度为360 nM多肽（生物素偶联的aminohexyl-EEEEYFELVAKKKK-NH2），75 μM ATP, 10 μM MgCl2]，同时加入1 μL 溶解在DMSO中的Pazopanib。滴定板在室温条件下孵育1小时，然后加入20 μL 100 mM 的EDTA终止反应。终止之后，加入20μL HTRF试剂（终浓度为15 nM 链亲和素偶联的别藻蓝素，用0.1 mg/mL BSA, 0.1 M HEPES, pH 7.5稀释的1 nM铕标记的酪氨酸磷酸化抗体）孵育十分钟以上。使用Wallac Victor的时间分辨荧光仪测定665 nM处的荧光值，时间间隔为50 μs。

细胞实验

• Cell lines: HUVEC细胞
• Concentrations: 0 μM -10 μM
• Incubation Time: 1 小时
• Method:

检测经过VEGF处理过的HUVEC细胞中VEGFR2的磷酸化水平。细胞按每板100万到150万个的密度培养在铺有I型胶原蛋白的10 cm平板上，培养基选用 Clonetics EGM-MV。培养24小时后, 将原来的培养基换成含有0.1% BSA和500 μg/mL hydrocortisone 的Clonetics EBM 培养基，对细胞进行过夜的血清饥饿处理。然后用不同浓度的 Pazopanib 处理细胞1小时, 随后用10 ng/mL 的VEGF 或者对照物处理细胞10分钟。将细胞溶解在裂解液中。用flk-1的抗体对VEGFR2进行免疫沉淀反应，随后进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，然后用flk-1 或者 antiphosphotyrosine (anti-P-tyr-biotin)的抗体进行蛋白免疫印迹的检测。通过光密度法测量将VEGFR2的磷酸化水平量化并将总的VEGFR2水品标准化。

动物实验

• Animal Models: 携带SYO-1细胞的免疫缺陷小鼠
• Formulation: —
• Dosages: 0 mg/kg, 10 mg/kg, 30 mg/kg或100 mg/kg
• Administration: 口服