Pelitinib (EKB-569)是一种有效的，不可逆EGFR抑制剂，IC50为38.5 nM。

特性

EKI-785的改良版。

靶点

体外研究

Pelitinib作用于EGFR比作用于密切相关的c-erbB-2，以及其他激酶，比如Src，Cdk4，c-Met，Raf，和MEK/ERK(IC50范围为282 nM( Src)到>20 μM(Cdk4))，表现出更高的抑制活性。同样地，在A431细胞中，Pelitinib治疗显著抑制EGFR的自磷酸化，而对c-Met没有作用。Pelitinib有效抑制正常人角质细胞(NHEK)，以及A431和MDA-468肿瘤细胞的增殖，IC50分别为61 nM，125 nM，和260 nM，而对MCF-7细胞活性较低，IC50为3.6 μM。A431和NHEK 细胞中，Pelitinib抑制EGF诱导的EGFR磷酸化，IC50 为20-80 nM，也会抑制STAT3的磷酸化，IC50为30-70 nM。75-500 nM 的Pelitinib也会特异性抑制AKT和ERK1/2的活化，而不影响NF-κB通路。在NHEK细胞中，Pelitinib也能有效抑制TGF-α介导的EGFR活化，IC50为56 nM，抑制STAT3和ERK1/2的活化，IC50分别为60 nM和62 nM。

体内研究

在过表达EGFR的A431异种移植模型中，10 mg/kg Pelitinib单剂量口服有效抑制EGFR磷酸化，1小时内抑制90%，24小时后抑制率>50%。Pelitinib(20 mg/kg/day)给药抑制APCMin/+小鼠体内87%的肿瘤发生，相当于2倍剂量EKI-785 (40 mg/kg/day)的作用，与较高的体内活性一致。Pelitinib选择性抑制体内气道上皮细胞中EGFR信号。小鼠气道上皮细胞重构模型，能够被病毒感染诱导，具有延迟但永久性转变为杯状细胞化生的特点，Pelitinib(20 mg/kg/day)治疗通过完全阻断纤毛细胞的增加和Clara细胞的减少，从3个方面校正上皮细胞重构，并显著抑制杯状细胞的化生。

乐伐替尼

MB5074

利尼伐尼；ABT869

MB1394

阿西替尼

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.1371 mL

10.6856 mL

21.3712 mL

5 mM

0.4274 mL

2.1371 mL

4.2742 mL

10 mM

0.2137 mL

1.0686 mL

2.1371 mL

50 mM

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EGFR在细胞中的自磷酸化:
对于体外细胞培养实验，A431细胞用不同浓度的Pelitinib处理2.75小时，然后与100 ng/mL EGF联合培养0.25小时。细胞用冷的磷酸缓冲盐水(PBS)洗涤2次，加入裂解缓冲液(10 mM Tris，pH 7.5，5 mM 乙二胺四乙酸(EDTA)，150 mM NaCl，1% Triton X-100，1% 脱氧胆酸钠，0.1 % SDS，1 mM PMSF，10 mg/mL 胃酶抑素A，10 mg/mL亮抑酶肽，20 KIU/mL 抑肽酶，2 mM 原钒酸钠，和100 mM 氟化钠)在冰上放置20分钟，然后用于免疫沉淀反应和SDS-PAGE-免疫印迹法。对于免疫沉淀反应，培养的细胞放置在冷的裂解缓冲液中，并立即在冰上通过具有几个脉冲的均质机均质化。将匀浆首先在2500 rpm (20分钟，4 °C)下离心，然后再在微型离心机(10 分钟，4 °C)上以14,000 rpm离心。上清液(1000 μg蛋白质)在4℃下与15 mL EGFR多克隆抗体培养2小时。2小时后，加入50 μL蛋白质G/蛋白质A琼脂糖小球，4℃下等速旋转培养2小时。用裂解缓冲液洗涤后，将珠子在Laemmli样品缓冲液中煮沸2分钟。然后蛋白质用SDS-PAGE分离，转移到Immobilon膜上，并用与辣根过氧化物酶(HRP)耦合的抗磷酸酪氨酸抗体探测过夜。细胞膜用ECL试剂开发。总EGFR蛋白质通过剥离膜，并用受体特异性抗体重新探测确定。珠子的定量通过光密度测定法，使用ImageQuant软件与分子动力学激光透过扫描仪完成。

细胞实验

• Cell lines: NHEK，A431，MCF-7，和 MDA-468
• Concentrations: 在DMSO中溶解，终浓度为~10 μM
• Incubation Time: 5天
• Method: 细胞接种在96孔板，2小时后，加入Pelitinib，培育5天。培养后，从每孔中移除培养基，加入新鲜培养基(150 μL) + 1 mg/mL MTT溶液(50 μL)。37 °C下培养2小时后，培养基用150 μL DMSO取代，每孔中的吸光度在540 nm下测定。IC50通过数据的线性回归计算。

动物实验

• Animal Models: 负荷皮下移植A431肿瘤的无胸腺 nu/nu 雌性小鼠，或 APCMin/+ 雄性小鼠，人类家族性腺瘤样息肉病小鼠模型(FAP)
• Formulation: 溶于 pH 2.0 的水中
• Dosages: 10，或20 mg/kg/day
• Administration: 口服强饲