SGI-1027是一种DNMT抑制剂，作用于DNMT1，DNMT3A和DNMT3B，无细胞试验中IC50分别为6，8和7.5 μM。

特性

潜在用于后生癌症的治疗。

靶点

体外研究

SGI-1027通过直接抑制DNMTs而抑制DNA甲基化，并导致DNMT1在各种人癌细胞系中选择性降解。SGI-1027在大鼠肝癌H4IIE细胞中表现出很小或没有毒性作用。SGI-1027 (0-100 μM)在U937人白血病细胞系中表现出适度的促凋亡作用，而在细胞周期中没有相关变化

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.1668 mL

10.8338 mL

21.6675 mL

5 mM

0.4334 mL

2.1668 mL

4.3335 mL

10 mM

0.2167 mL

1.0834 mL

2.1668 mL

50 mM

0.0433 mL

0.2167 mL

0.4334 mL

DNA 甲基转移酶(CpG 甲基转移酶) 试验:
DNA甲基化酶的活性通过使用修改过的DE-81离子交换过滤器试验，测量Ado-Met的3H1甲基组与DNA的整合而测定。重组人DNMT1，重组小鼠Dnmt3a/ Dnmt3b (500 纳克)与500纳克poly(dI-dC)或半甲基化DNA双链和75或150 nM (0.275μCi 或 0.55μCi)的[甲基-3H]- 腺苷甲硫氨酸(Ado-Met)，总体积为50微升，在37℃下培育1小时。M. Sss I在供体缓冲液中进行测试。加入指示浓度的SGI-1027或decitabine。每个反应重复两份进行，包括不含抑制剂或DNA的对照组。在Whatman DE-81离子交换过滤盘上浸透反应混合物停止反应，清洗(5次，每次10分钟，用0.5M 磷酸钠缓冲液；pH 7.0)干燥，并在闪烁计数器上计数。从包含DNA的反应混合物得到的值中减去背景放射性(无DNA的对照组)，不含任何抑制剂的反应得到的放射性作为100%活性。IC50通过百分比活性相对于抑制剂浓度的曲线图确定。为测定SGI-1027对DNMTase活性的抑制，在固定浓度抑制剂(0，2.5，5，和10μM)存在下，测定DNMT1酶的活性，而两个中的一个(Ado-Met或DNA)在特定反应混合物中变化。在固定DNA浓度(500 纳克) 下，Ado-Met的浓度变化范围为25-500 nM。同样的，75 nM Ado-Met下，最终DNA浓度变化范围为25-500纳克。

细胞实验

• Cell lines: 大鼠肝癌 H4IIE 细胞
• Concentrations: ~300 μM
• Incubation Time: 48小时
• Method: 大鼠肝癌H4IIE细胞用作测试系统。这些细胞在DMEM中生长，用胚牛血清(10%)和小牛血清(10%)进行增补。将细胞接种在96孔板，48小时后，暴露于0到300微摩尔/升浓度的SGI-1027。溶解性通过Nephalometry技术在给药后立即测定，并在24小时收集细胞前进行测定。经过曝光后，分析细胞或者它们的上层清液(培养基)在细胞分化(碘化丙啶)，膜渗漏(α-GST)，线粒体功能[3-(4,5-二甲基吡啶-2-yl)-2,5-二苯基溴和细胞内ATP]，氧化应激(细胞内 GSH和8-异前列烷)，以及细胞凋亡中的改变。半数最大毒性浓度(TC50)通过级量反应曲线确定。

SGI-1776是新型的，ATP竞争性的Pim1抑制剂，IC50为7 nM,比作用于Pim2 和Pim3选择性分别高50和10倍,也有效作用于Flt3 和haspin。

靶点

Pim1

Pim2

Pim3

FLT3

IC50

7 nM

0.363 uM

69 nM

44 nM

体外研究

除了 Pim, SGI-1776也有效作用于FLT3 (IC50 = 44nM)。SGI-1776处理AML细胞，诱导细胞凋亡，这种作用存在浓度依赖性。SGI-1776 作用于AML原代细胞，具有毒性，且导致Mcl-1 蛋白降低。SGI-1776处理CLL细胞，诱导细胞凋亡，这种作用存在剂量依赖性。SGI-1776作用于CLL，诱导凋亡，作用机理涉及到Mcl-1减少。SGI-1776处理的CLL细胞中，观察到诱导凋亡，伴随着RNA合成受抑制。在体外，SGI-1776具有毒性，且平均相对IC50值为3.1 mM。相反, SGI-1776诱导完整的皮下MV4;11反应。

体内研究

SGI-1776有效作用于携带MV-4-11肿瘤的小鼠模型。SGI-1776作用于白血病和实体瘤细胞系，具有临床前期活性,IC50为0.005-11.68 mM。在体内，SGI-1776作用于31分之9的实体移植瘤和8分之1的ALL移植瘤，显著诱导EFS分布中的分化。

特征

SGI-1776是治疗CLL的潜在试剂，进一步强调了MCL-1在CLL的重要性。

SMI-4a

MB6975

AZD1208

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.4666 mL

12.3329 mL

24.6658 mL

5 mM

0.4933 mL

2.4666 mL

4.9332 mL

10 mM

0.2467 mL

1.2333 mL

2.4666 mL

50 mM

0.0493 mL

0.2467 mL

0.4933 mL

进行辐射检测测量激酶抑制情况。检测实验含肽底物,已知纯化的重组人类激酶,gamma-标记的ATP, Mg2+, 及混合浓度(1 μmol/L)SGI-1776。在终体积为25 μL的反应中, 5到10 mU Pim1/2/3与 8 mmol/L MOPS, pH 7.0; 0.2 mmol/L乙二胺四乙酸; 100 μM KKRNRTLTV;10 mM MgAcetate; 及[γ-32P-ATP] 温育。加入MgATP混合物开始反应。在室温下温育40分钟，加入5 μL 3% 磷酸溶液终止反应。10 μL 反应转移到P30过滤板上，在75 mmol/L 磷酸中冲清洗3次，持续5分钟，然后在甲醇中清洗1次，然后烘干，使用闪烁计数器测量。

细胞实验

• Cell lines: MV-4-11, MOLM-13, 和 OCI-AML-3细胞系
• Concentrations: 0.1, 0.3, 1, 3, 或10μM
• Incubation Time: 24 小时
• Method: 细胞培养在含10% FBS 的IMDM (ATCC)培养基中，然后生长在37oC含5% CO2环境下。使用购买的试剂盒对支原体感染的细胞做常规检测。使用DMSO 或不同浓度SGI-1776 处理细胞24小时。冲洗细胞(1×106),然后再悬浮在 100 μL膜联蛋白结合 buffer中, 与5 μL FITC 溶液及5 μL 碘化丙啶(PI;50 μg/mL)溶液混合。每组样本中,使用Becton Dickinson FACSCalibur 流式细胞仪测量1×104个细胞。

动物实验

• Animal Models: 雌性NOD-SCID小鼠
• Formulation: 5% 葡萄糖
• Dosages: 75 mg/kg和200 mg/kg
• Administration: 口服处理