Ezetimibe 是一种有效的、选择性的胆固醇吸收抑制剂，用来降低胆固醇。

靶点

NPC1L1

体外研究

Ezetimibe显著降低总胆固醇，LDL胆固醇和甘油三酸酯，以及适度增加高密度脂蛋白胆固醇。在Caco-2细胞中，Ezetimibe降低31％的胆固醇运输，但不影响黄醇转运。Ezetimibe导致表面受体SR-BI，Niemann-Pick C1型类似蛋白1，ATP结合盒转运子，亚族A（ABCA1）和核受体维甲酸受体（ RAR）的γ，固醇调节元件结合蛋白（SREBP）-1和-2，肝X受体（LXR）的β亚基的mRNA的表达显著降低。

体内研究

西式，含低脂肪且无胆固醇饮食的小鼠中，Ezetimibe降低血浆胆固醇水平分别从964至374 毫克/分升，从726至231毫克/分升，而从516至178毫克/分升。Ezetimibe减少主动脉粥样硬化病变的表面积，从对照组的20.2％到西方饮食组的4.1％和低脂肪胆固醇饮食小鼠的7.0％。Ezetimibe减少颈动脉粥样硬化病变的横截面面积，在西部和低脂胆固醇饮食组中为97%，在无胆固醇的小鼠中为91%。在西部，低脂肪和无胆固醇的饮食的小鼠中，Ezetimibe抑制胆固醇吸收，降低血浆胆固醇，增加高密度脂蛋白水平，并抑制动脉粥样硬化。在临床前动物模型中，Ezetimibe有效抑制胆固醇运输穿过肠壁，从而降低血浆胆固醇血症。在大鼠中，Ezetimibe消除肠道的胰腺外分泌功能，同时保持胆汁流量。在胆固醇喂养的仓鼠中，Ezetimibe降低血浆胆固醇和肝胆固醇积累，ED50为0.04 毫克/千克。

依泽替米贝;依折麦布(标准品)

MB25757

依泽替米贝-d4

MB25759

3-O-乙酰依泽替米贝-d4

MB25758

二醋酸盐依泽替米贝-d4

MB25762

依泽替米贝羟基β-D-葡萄糖苷酸-d4

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.4426 mL

12.2130 mL

24.4260 mL

5 mM

0.4885 mL

2.4426 mL

4.8852 mL

10 mM

0.2443 mL

1.2213 mL

2.4426 mL

50 mM

0.0489 mL

0.2443 mL

0.4885 mL

• GST-p62由大肠杆菌制备，0.5μg纯化的GST-p62蛋白用于体外AMPK磷酸化测定。 通过使用γS-ATP的非放射性同位素方法测定AMPK对p62蛋白的磷酸化。 从HEK293细胞免疫纯化AMPK复合物，用Flag-AMPKβ1和HA-AMPKγ1转染myc-AMPKα1野生型（WT）或myc-AMPKα1激酶死亡突变体（KD，D157A）。 将AMPK复合物加入到含有20mM HEPES，pH7.4,1mM EGTA，0.4mM EDTA，5mM MgCl 2,0.05mM DTT，0.5μgGST-p62,0.2mM AMP和1mMATPγS的反应混合物中。 反应在37℃下进行30分钟，然后加入20mM EDTA终止反应。 为了检测γS-标记的p62蛋白，将反应产物在室温下用2.5mM PNBM烷基化2小时，并使用抗硫代磷酸酯抗体通过蛋白质印迹分析产物。

细胞实验

• 将Huh7人肝细胞在含有10％FBS，100单位/ mL青霉素和100μg/ mL链霉素的高葡萄糖DMEM中于37℃，95％空气/ 5％CO 2气氛中培养。 用或不用依泽替米贝（10μM，1小时）处理肝细胞，并与棕榈酸（PA，0.5mM，24小时）一起温育。

动物实验

• 老鼠
• 使用10周龄的C57BL / 6J雄性小鼠。将这些动物随机分配到三组中的一组（每组7-10只小鼠）：正常食物; MCD饮食，载体治疗;或MCD饮食，依泽替米贝治疗。小鼠可自由饮食和饮水，温度保持在23±2℃，湿度为60％±10％，12小时光照/黑暗循环。在含有依泽替米贝组的MCD饮食中，通过口服强饲法每天一次给予依泽替米贝10mg / kg，持续4周。具有赋形剂组的食物和MCD饮食接受相同体积的磷酸盐缓冲盐水口服4周。在治疗期间每周测量一次体重。 4周后，将小鼠麻醉并杀死;通过心脏穿刺收集血液。收获组织并在液氮中快速冷冻并储存在-70℃或固定在福尔马林中并包埋在石蜡中。
• 大鼠
• 使用雄性OLETF（n = 11）和年龄匹配的LETO大鼠（n = 3），并且在具有12小时光/暗循环的无特定病原体的设施中进行实验。 OLETF大鼠是代表迟发性高血糖症的模型，并且表现出慢性病程，轻度肥胖和糖尿病的临床发作。动物可以不受限制地获取水和食物。在12周龄时，将大鼠随机化并通过胃管饲法用PBS或依泽替米贝（10mg / kg /天）处理20周。在研究结束时，将大鼠禁食过夜并用腹膜内Zoletil / Rompun麻醉。从腹主动脉收集血液，解剖肝组织，立即在液氮中冷冻，并储存在-80℃直至进一步分析。

Fasudil(HA-1077)是一种有效的、具有选择性的Rho抑制剂（ROCK2, Ki=0.33 μM），同时对PKA、PKG、PKC和MLCK也具有抑制活性，Ki值分别为1.6 μM、1.6 μM、3.3 μM、36 μM。

靶点

体外研究

Fasudil是一类钙离子拮抗剂。Fasudil竞争性抑制Ca2+诱导的去极化兔主动脉收缩。Fasudil 抑制对KCl, phenylephnne (PHE) 和前列腺素(PG)F2a的收缩反应。Fasudil也具有血管扩张的作用，通过抑制螺旋条收缩诱导的5-羟色胺，去甲肾上腺素，组胺，血管紧张素，和多巴胺。Fasudil诱导肌动蛋白纤维解体，且抑制细胞迁移。Fasudil抑制肝星状细胞的扩散，应力纤维的形成，和α-SMA的表达，且抑制细胞生长，但不诱导细胞凋亡。Fasudil 抑制LPA诱导的 ERK1/2, JNK 和 p38 MAPK磷酸化

体内研究

Fasudil按30 μg剂量通过冠状动脉内注射给药实验狗，CBF提高约50％。Fasudil (0.01, 0.03, 0.1 和 0.3 mg/kg,静脉注射)降低MBP，提高 HR, VBF, CBF, RBF, 和FBF，这种作用具有剂量依赖性。总剂量为1.0 ng/mL的 Fasudil提高心脏的输出量。Fasudil静脉注射处理实验狗，显著降低MBP，左心室收缩压，和总外周阻力，提高HR和心脏输出量，而右心房压力，dP/dt 和左心室每分钟所做的功没有显著变化。在缺血性损伤的情况下，Fasudil处理，对心血管疾病具有保护作用，且降低JNK的激活，抑制线粒体AIF核易位。Fasudil每天按100 mg/kg剂量口服给药对PLP p139-151免疫的SJL/J小鼠，显着降低发病率和EAE临床评分的平均最高值。Fasudil处理小鼠，抑制脾细胞对抗原的增殖反应。Fasudil口服给药小鼠，可减轻炎症，和脱髓鞘作用。

cAMP依赖性蛋白激酶活性检测

在含50mM Tris-HCl（pH7.0），10mM醋酸镁，2mM EGTA，有或无1μM cAMP，3.3到20μM[r-32P] ATP (4×105 c.p.m.)，0.5μg酶，100μg的组蛋白 H2B 和化合物的反应混合物(终体积为0.2 mL)中进行cAMP依赖性蛋白激酶活性分析。反应混合物在 30°C下温育 5分钟。加入500 μg 牛血清白蛋白作为载体蛋白后，加入1mL冰冻的20%三氯乙酸终止反应。样品在3000 r.p.m.转速下离心15分钟，将沉淀再悬浮于冰冷的10％三氯乙酸溶液中，离心再悬浮循环重复三次。最终的沉淀溶解在1 mL 1N NaOH中，使用液体闪烁计数器测量放射性

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

3.0504 mL

15.2518 mL

30.5036 mL

5 mM

0.6101 mL

3.0504 mL

6.1007 mL

10 mM

0.3050 mL

1.5252 mL

3.0504 mL

50 mM

0.0610 mL

0.3050 mL

0.6101 mL

157.1

化学式

C5H4FN3O2

CAS号

259793-96-9

稳定性

3 years -20°C powder

2 years -80°C in solvent

31 mg/mL (197.32 mM)

Ethanol

22 mg/mL warmed (140.03 mM)

Water

5 mg/mL warmed (31.82 mM)

Favipiravir (T-705)是一种有效的选择性RNA-dependent RNA polymerase抑制剂。

靶点

体外研究

Favipiravir表现出抗流感病毒活性，对甲型流感病毒，乙型流感病毒和丙型流感病毒的IC50 范围分别为0.013-0.48 μg/ml，0.039-0.089 μg/ml，和0.030-0.057 μg/ml。在哺乳动物细胞系 (MDCK细胞，Vero细胞，HEL细胞，A549细胞，HeLa细胞，和HEp-2 细胞) 中，高达1,000 μg/ml 浓度的Favipiravir没有表现出毒性。在接种季节性甲型流感(H1N1)病毒的MDCK细胞中，Favipiravir诱导致死性突变发生。

体内研究

在流感病毒感染的小鼠中，Favipiravir (200 mg/kg/day, p.o.)保护小鼠不被流感病毒感染而死亡。在人工感染Ebola病毒的小鼠中，Favipiravir有效阻断病毒产生，在治疗起始2天和6天后分别达到95%和99.6%的抗病毒效果。

254.17

化学式

C10H5F3N4O

CAS号

370-86-5

稳定性

3 years -20°C powder

50 mg/mL (196.71 mM)

Ethanol

50 mg/mL (196.71 mM)

Water

Insoluble

FCCP在线粒体中式一种有效的氧化磷酸化的解偶联剂，通过转运质子破坏ATP的合成。

体外研究

在体外实验中，FCCP的处理能诱导细胞内Ca2+迅速升至2倍，同时抑制蛋白合成速率。对蛋白翻译速率的抑制作用与eIF2α的磷酸化增加以及依赖双链RNA的蛋白激酶活性增加有关。FCCP还可轻微地减少ATP以及活性氧水平，提高线粒体基因如Tfam和COXIV的表达，诱导老鼠造血干细胞的静态形态特征以及抑制TGF-β的信号转导。

体内研究

FCCP的处理在8细胞期的小鼠胚胎中可显著降低线粒体膜电位、ATP的生成以及囊胚中细胞内细胞团的数量，对胚泡发育没有影响。在胚胎线粒体功能受到干扰的同时，在胚胎植入后，雌性后代的出生体重下降，抑制持续到断奶阶段。尽管FCCP处理过的雄性小鼠也和雌性小鼠一样，葡萄糖耐受量降低。但是它们的胰岛素敏感度和肥胖度在4-14周内无变化。在预压胚中，线粒体功能降低，然后减少ATP的输出，将影响其后代表型。

细胞实验：
(仅供参考)

• Cell lines: PC12细胞
• Concentrations: 30 μM
• Incubation Time: 30 min, 1h, 2h
• Method:

用直径为24-mm的多孔板，加入含0.175 Ci/mmol的[3H]methionine的新鲜培养液，37℃孵育30分钟。在不同的时间段对PC12细胞处理以FCCP，测定蛋白质合成速率。

Fedratinib (SAR302503, TG101348)是一种选择性JAK2抑制剂，在无细胞试验中IC50为3 nM，作用于JAK2比作用于JAK1和JAK3选择性高35和334倍。

靶点

体外研究

TG-101348也显著抑制JAK2 V617F, Flt3和Ret，IC50分别为3 nM, 15 nM和48 nM。TG101348对密切相关的JAK3的IC50高300倍以上，对JAK1和TYK2家族抑制效果不强。TG101348抑制有JAK2V617F突变的人红细胞白血病细胞系，以及一种表达人JAK2V617F（的Ba/F3 JAK2V617F）鼠前B细胞系的增殖，IC50分别是305 nM 和270 nM。G-101348也抑制亲本Ba/F3细胞的增殖至一般水平，IC50约为420 nM。TG101348降低STAT5磷酸化的浓度和抑制细胞增殖所需的浓度一致。TG101348以剂量依赖的方式诱导HEL和JAK2V617F Ba/F3细胞的凋亡。TG101348在浓度高达10 μM时对正常人真皮成纤维细胞没有促凋亡活性。TG101348降低GATA-1的表达，这和erythroid-skewing JAK2V617F+祖细胞分化有关，并且抑制STAT5和GATA S310的磷酸化。TG101348抑制HMC-1.1（KITV560G）细胞的增殖，活性低于HMC-1.2 (KITD816V, KITV560G)细胞，IC50分别为740 nM和407 nM。

体内研究

TG101348有治疗JAK2V617F相关的骨髓增生性疾病(MPD)的潜力。在TG101348处理的动物中血细胞比容和白细胞计数有统计学显著减少，以剂量依赖性减少/消除髓外造血，至少在某些情况下，表现为衰减性骨髓纤维化，具有替代终点，包括减少/消除的JAK2V617F疾病负担，抑制内源性红细胞集落的形成相关，在体内抑制JAK-STAT信号转导。有没有明显的毒性并对T细胞数量无影响。TG101348（120 mg/kg）口服显著抑制体内光伏红系祖细胞分化。

MB8031

TG101209

MB3925

WP1066

MB4581

XL019

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.9059 mL

9.5296 mL

19.0592 mL

5 mM

0.3812 mL

1.9059 mL

3.8118 mL

10 mM

0.1906 mL

0.9530 mL

1.9059 mL

50 mM

0.0381 mL

0.1906 mL

0.3812 mL

无细胞激酶活性测定:
TG101348 的IC 50值使用Invitrogen公司的223激酶试剂盒测定，其中包括JAK2和JAK2V617F，或者Carna Biosciences的所有Janus激酶家族成员试剂盒，包括JAK1和TYK2。ATP浓度设定为激酶的Km值。

细胞实验

• Cell lines: EpoBa/F3 JAK2V617F, Ba/F3p210, HEL和K562细胞
• Concentrations: 溶解在DMSO中至终浓度约10 μM
• Incubation Time: 72小时
• Method: 约2×103细胞接种到微量滴定板的孔中，加入含指定浓度抑制剂的100μLRPMI-1640培养基。TG101348温育72小时，50 μL XTT染料加入到每个孔中并孵育4小时，在CO2培养箱中培养。有色甲臜产物用分光光度法在450nm处测定在650nm处校正。50％的抑制作用（IC50）的浓度用GraphPad Prism 4.0软件确定。所有的实验都重复3次，并且结果和未处理的细胞的生长做比较。EpoBa/F3 JAK2V617F，Ba/F3p210，HEL和K562细胞凋亡是用DMSO和TG101348浓度的增加诱导来确定。

动物实验

• Animal Models: C57BL / 6小鼠静脉注射表达JAK2V617F的全骨髓
• Formulation: 溶解DMSO，生理盐水稀释
• Dosages: 约120 mg/kg
• Administration: 口服，两天一次

描述

Fenebrutinib (GDC-0853)是一种有效的、选择性的非共价BTK抑制剂，对BRK的Ki值为0.91 nM。对BTK的IC50值是对其他3种脱靶激酶的100倍以上。（Bmx :153倍, Fgr: 168倍, Src:131倍）。

靶点

体外

用1 μM GDC-0853在广谱性人源激酶库中进行生化筛选发现，在286种脱靶激酶中，GDC-0853仅对其中3种具有抑制作用，而且GDC-0853对BTK的选择性/效力远大于对这三种激酶的选择性（Bmx，Fgr，Src）。GDC-0853可抑制B细胞BCR信号和单核细胞FcγR信号。GDC-0853与BTK结合的平均停留时间为18.3 ± 2.8小时。GDC-0853可抑制细胞中WT BTK和C481S突变体的自身磷酸化。在体外，用GDC-0853处理慢性淋巴细胞白血病细胞，然后予以BCR信号刺激，GDC-0853处理可降低BTK磷酸化水平、减弱下游靶标如PLCγ2, AKT和ERK的激活。GDC-0853抑制依赖于NF-κB的转录、减少其激活并阻止细胞迁移。在细胞内，GDC-0853对EGFR和ITK没有抑制作用，也不影响T细胞受体的激活。

体内

在大鼠中，通过腹腔注射给予其0.2 mg/kg或通过口服给予1 mg/kg GDC-0853，检测其药代动力学特征：GDC-0853具有适度中等的清除率(CL=27.4 mL/min/kg)、生物利用度良好（F=65%）、分布容积（Vd）为5.42 L/kg，半衰期 (t1/2) 为2.2小时。GDC-0853在狗中也同样具有良好的药代动力学特征：半衰期为3.8小时，Clp=10.9 mL/min/kg，Vd 2.96 L/kg，口服生物利用度高，这使得GDC-0853在狗体内进行的毒理学实验能达到走狗的暴露。在大鼠和狗中，GDC-0853耐受良好。GDC-0853能有效在动物模型中治疗类风湿性关节炎和其他B细胞或骨髓细胞介导的自身免疫病。在人体单次上升剂量给药实验(0.5 mg-600 mg)和多次上升剂量给药实验(250 mg BID-500 mg QD)中（给药时间14天），GDC-0853耐受良好，无严重副作用和剂量限制毒性。GDC-0853吸收良好，具有线性、剂量比例药代动力学特征[1]。在Sprague-Dawley大鼠中，GDC-0853或其他结构多样的BTK抑制剂的给药（7天或更长时间）会导致胰腺病变，发生多灶性胰岛中心出血、炎症、纤维化和含色素巨噬细胞，邻近小叶外分泌腺泡细胞萎缩、退化和炎症反应，而类似反应没有在小鼠或狗中发现（即使将浓度提升），该反应是SD大鼠物种特异的。。

激酶实验

Kinase selectivity:
Btk inhibitor kinase selectivity was assessed at a concentration of 1 µM in a panel of up to 287 recombinant human kinase activity and binding assays, including cytoplasmic and receptor tyrosine kinases, serine/threonine kinases, and lipid kinases. The kinase activity assays measured peptide phosphorylation or ADP production while the binding assays monitored displacement of ATP sitebinding probes. The ATP concentrations used in the activity assays were typically within 2-fold of the experimentally determined apparent Michaelis constant (Kmapp) value for each kinase while the competitive binding tracer concentrations used in the binding assays were generally within 3-fold of the experimentally determined dissociation constant (Kd) values. Inhibitors were tested in duplicate against each kinase and the mean % Inhibition values were reported. For kinases that were inhibited by close to or greater than 80% at the test concentration, 10-point inhibitor titrations using the same assays were carried out in order to determine the inhibitor concentrations that caused 50% inhibition (IC50).

细胞实验

• Cell lines: 慢性淋巴细胞白血病细胞
• Concentrations: 1 μM
• Incubation Time: 48 hours
• Method:

用1 μM BTK抑制剂处理细胞，然后通过流式分析检测细胞活性。 
(Only for Reference)

动物实验

• Animal Models: Sprague-Dawley, Wistar-Han和Fischer-344大鼠 (6-12周龄)
• Formulation: 1.0% (w/v) 4000 cps 羟甲基纤维素, 0.2% (v/v) Tween 80 和 100 mM 柠檬酸盐缓冲剂 (pH 3.0 ± 0.1) 与反渗水中制备
• Dosages: 5 或 10 mL/kg
• Administration: p.o.
  (Only for Reference)

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.5042 mL

7.5211 mL

15.0421 mL

5 mM

0.3008 mL

1.5042 mL

3.0084 mL

10 mM

0.1504 mL

0.7521 mL

1.5042 mL

Fenofibric acid是一种降脂剂，降低低密度脂蛋白胆固醇和甘油三脂。

靶点

体外研究

Fibric acids，降脂药的活化形式，也是PPARα的激动剂，具有提高高密度脂蛋白的效果。Fibric acids增强脂肪酸分解代谢、降低血脂水平–主要是甘油三酸酯水平。它上调了ABCA1的表达以及apoA-I所介导的HDL生成。 Fibric acids通过增强依赖于LXR的ABCA1基因的转录来发挥它对ABCA1表达的作用。

体内研究

Fenofibric acid减弱OIR小鼠中循环的内皮祖细胞（EPC）的异常增多。它对EPC调动的抑制作用是依赖于PPARα的。Fenofibric acid 抑制低氧诱导的视网膜内皮祖细胞增多、减少循环中的CXCR4阳性的EPC数量，下调血清中SDF-1水平并抑制视网膜中HIF-1a和SDF-1的过表达。

• Cell lines: RAW264细胞；THP-1细胞
• Concentrations: 0-200 μmol/L
• Incubation Time: 48 h
• Method: 将PPAR激活剂fenofibric acid溶解于DMSO中并加入到含0.2%BSA的培养基。RAW263细胞用PSB洗涤，与fenofibric acid在DMEM/F-12(1:1)培养基中共孵育48小时。在最后24小时的化合物处理中，加入300 mol/L dibutyryl cAMP和poA-I (10 μg/mL)。用fenofibric acid同样地处理THP-1细胞，同时加入apoA-I（in 0.2% BSA-RPMI 1640 medium）和0.1% BSA-MEM。通过酶解确定apoA-I释放到培养基中的胆固醇和含有胆碱之磷脂质。粘连细胞溶解在0.1 N NaOH，用于后续蛋白质测定。

动物实验：

• Animal Models: C57BL/6J; PPARa -/- mice
• Formulation: DMSO
• Dosages: 10 mg/kg
• Administration: 腹膜腔内注射

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.4884 mL

12.4421 mL

24.8843 mL

5 mM

0.4977 mL

2.4884 mL

4.9769 mL

10 mM

0.2488 mL

1.2442 mL

2.4884 mL

50 mM

0.0498 mL

0.2488 mL

0.4977 mL

• Animal Models: 狗
• Formulation: 20 μg/kg
• Dosages: 0.9% NaCl
• Administration: 静脉注射