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NEB代理 , 糖生物学与蛋白质工具 , 噬菌体展示,Ph.D.-C7C 噬菌体展示肽库试剂盒,#E8120S

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产品资料 – 糖生物学与蛋白质工具 – 噬菌体展示

Ph.D.-C7C 噬菌体展示肽库试剂盒

#E8120S 10 次淘选实验

相关产品

Ph.D.-7 噬菌体展示肽库试剂盒
Ph.D.-12 噬菌体展示肽库试剂盒
Ph.D.-C7C 噬菌体展示肽库试剂盒
抗 M13 pIII 单克隆抗体

Ph.D.试剂盒组成

– 10 次独立淘选实验的足量噬菌体展示库，109 个克隆
– 28 gIII 测序引物（100 pmol）
– 96 gIII 测序引物（100 pmol）
– E. coli 宿主菌 ER2738
– 对照实验靶分子（链霉亲和素）和洗脱剂（生物素）
– 详细的使用手册
 建议测序引物序列（不单独提供）如下：
-28 gIII 测序引物 (22-mer)
5´d(GTATGGGATTTTGCTAAACAAC)3´
-96 glll 测序引物 (20-mer)
5´d(CCCTCATAGTTAGCGTAACG)3´

概述

噬菌体展示是一种体外筛选技术。它可以将一系列多肽或蛋白质文库展示在噬菌体颗粒的外部，而编码这些蛋白的 DNA 则位于病毒颗粒内部。利用展示蛋白与其编码 DNA 之间的联系，我们可以通过一种简单的称为“生物淘选”的体外筛选方法，快速筛选出给定靶分子（抗体、酶、细胞表面受体等）的亲和配体。最简单的淘选方法是（见图 1）：将展示不同多肽的噬菌体文库与固定在平板或小珠上的靶分子孵育，先洗去未结合的噬菌体，而后洗脱特异性结合的噬菌体。扩增洗脱下的噬菌体。重复上述结合扩增过程，使与靶分子结合的多肽序列的噬菌体得到富集。经过 3-4轮筛选后，每个克隆通过 DNA 测序或 ELISA 鉴定。
NEB 提供 3 种随机肽库和供自制肽库所需的 M13KE克隆展示载体。这 3 种肽库包括 7 肽库（Ph.D.-7）、12 肽库（Ph.D.-12）和含有二硫键的环 7 肽库（Ph.D.-C7C）。Ph.D.-C7C 随机肽库所展示的多肽两侧各加了一个半胱氨酸。噬菌体组装时经过氧化，形成环化的多肽。所有肽库的容量超过 20 亿个克隆。上述 3 种肽库表达的随机肽均在噬菌体次要包膜蛋白 pIII 的 N 端，故每一个病毒粒子可以表达 5 个拷贝。
展示在噬菌体表面的随机肽库已被应用于多种领域，包括绘制抗原表位图谱（图 2）、研究蛋白质与蛋白质相互作用及酶抑制剂，并且还用于发现 GroEL、HIV、半导体表面、小分子荧光团和药物的肽配基。
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NEB代理 , 糖生物学与蛋白质工具 , 噬菌体展示,Ph.D.-12 噬菌体展示肽库试剂盒 v2,#E8210S

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Ph.D.-12 噬菌体展示肽库试剂盒 v2

#E8210S 10 panning experiments

说明

 本产品可直接替代 NEB #E8110S，Ph.D.™-12 噬菌体展示肽库试剂盒

特性

 Ph.D.-12™ 噬菌体展示肽库试剂盒 v2 包含 Ph.D.-12 噬菌体展示肽库、淘选实验中用作对照的DYKDDDDK 小鼠单克隆抗体、Protein G 磁珠，以及足够 >50 个测序反应的 -96 gIII 测序引物。Ph.D.-12 噬菌体展示肽库是一种随机 12 肽组合库，随机多肽与 M13 噬菌体的次要外壳蛋白（pIII）的 N 端融合表达。该肽库由约 109 种电转化（即独特的）的序列组成。

·即用型噬菌体肽库完整试剂盒（约 109 个克隆）
·新增用于对照淘选实验的单克隆抗体和 Protein G 磁珠
·相比之前的靶蛋白（链霉亲和素），对 DYKDDDDK 小鼠单克隆抗体能淘选出更可靠的表位结果
·不需要辅助噬菌体进行扩增
·利用表型和基因型之间的固有关联，在单个微量滴定孔或 EP 管中对数十亿个克隆进行筛选

概述

 噬菌体展示是一种体外筛选技术。它可以将一系列多肽或蛋白质库展示在噬菌体颗粒的外部，而编码这些蛋白的 DNA 则位于病毒颗粒内部 (1-3)。利用展示蛋白与其编码 DNA 之间的关联，我们可以通过一种称为“生物淘选”的体外筛选方法 (4)，快速筛选出与给定靶分子（抗体、酶、细胞表面受体等）亲和结合的噬菌体展示肽。最简单的淘选方法是（见图 1）：将展示不同多肽的噬菌体库与固定在平板或小珠上的靶分子孵育，先洗去未结合的噬菌体，而后洗脱特异性结合的噬菌体，扩增洗脱下的噬菌体。重复上述结合/扩增过程，使与靶分子结合的多肽序列的噬菌体得到富集。经过 3-4轮筛选后，每个克隆通过 DNA 测序或 ELISA 鉴定克隆。

Ph.D.-12 噬菌体展示肽库试剂盒 v2 的主要原理是将随机 12 肽库融合表达于 M13 噬菌体次要外壳蛋白 (pIII) 的 N 端（5-9）。随机 12 肽和野生型 pIII 序列之间，是一个短间隔序列（Gly-Gly-Gly）。该肽库由约 109 种电转化的序列扩增一次后获得，在 10 μl 提供的噬菌体肽库中，每种序列大约 100 个拷贝。
展示肽的连接形式：X12-GGG-野生型 M13 pIII
图 1：对展示于五价 pIII 蛋白上的多肽库进行淘选。
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特点：
·即用型噬菌体肽库完整试剂盒，利用表型和基因型之间的固有关联，能在单个微量滴定孔或 EP 管中对数十亿个克隆进行筛选；
·对照淘选实验不需要封闭步骤，避免了噬菌体与塑料板发生非特异性结合；
·使用 Protein G 磁珠进行对照淘选实验，减少了繁琐的板/孔洗涤步骤；
·随机区域足够长（12-mer），能够在分子内形成二级结构，以及在固定位置之间存在序列间隙；
·不需要辅助噬菌体进行扩增；
·利用简单的分子生物学和无菌培养技术，在不到一周的时间内筛选到特异性结合的多肽；
·提供 -96 gIII 测序引物 (500 pmol)，支持 >50 次测序反应。
注意事项
·对于 >30 天的长期储存，建议在 -80°C 条件下储存大肠杆菌 K12 ER2738。
·Protein G 磁珠应储存在 4°C，以防止因冷冻而损坏。
·原始版本 (NEB #E8110) 和新版本 (v2) 试剂盒 (NEB #E8210) 所提供的 Ph.D.-12 噬菌体展示肽库（NEB #E8111）完全一样。
·M13 与大多数缓冲液兼容； 然而，洗脱缓冲液可能会受到扩增所需的大肠杆菌培养条件的限制。如果使用二代测序，可以省略用于富集噬菌体库的扩增步骤。参阅最新文献以获取操作说明。
·提供的 -96 gIII 测序引物 (500 pmol) 支持 >50 次测序反应。
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1. Sidhu, S.S. (2000). Curr. Opin. Biotechnol.. 11, 610-616.
2. Rodi, D.J. and Makowski, L. (1999). Curr. Opin. Biotechnol. . 10, 87-93.
3. Wilson, D.R. and Finlay, B.B. (1998). Can. J. Microbiol.. 44, 313-229.
4. Parmley, S.F. and Smith, G.P. (1998). Gene. 73, 305-313.
5. Scott, J.K. and Smith, G.P. (1990). Science. 249, 386-390.
6. Whaley, S.R. et al. (2000). Nature. 405, 665-668.
7. Noren, K.A. and Noren, C.J. (2001). Methods. 23, 169-178.
8. Rozinov, M.N. and Nolan, G.P (1998). Chem. Biol.. 5, 713-728.
9. Rodi, D.J. et al. (1999). J. Mol. Biol.. 285, 197-203.

NEB代理 , 糖生物学与蛋白质工具 , 噬菌体展示,Ph.D.-7 噬菌体展示肽库试剂盒 v2,#E8211S

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Ph.D.-7 噬菌体展示肽库试剂盒 v2

#E8211S 10 panning experiments

说明

 本产品可直接替代 NEB # E8100S，Ph.D.™-7 噬菌体展示肽库试剂盒

特性

 Ph.D.-7™ 噬菌体展示肽库试剂盒 v2 包含 Ph.D.-7 噬菌体展示肽库、淘选实验中用作对照的DYKDDDDK 小鼠单克隆抗体、Protein G 磁珠，以及足够 >50 个测序反应的 -96 gIII 测序引物。Ph.D.-7 噬菌体展示肽库是一种随机 7 肽组合库，随机多肽与 M13 噬菌体的次要外壳蛋白（pIII）的 N 端融合表达。该肽库由约 109 种电转化（即独特的）的序列组成。

·即用型噬菌体肽库完整试剂盒（约 109 个克隆）
·新增用于对照淘选实验的单克隆抗体和 Protein G 磁珠
·相比之前的靶蛋白（链霉亲和素），对 DYKDDDDK 小鼠单克隆抗体能淘选出更可靠的表位结果
·不需要辅助噬菌体进行扩增
·利用表型和基因型之间的固有关联，在单个微量滴定孔或 EP 管中对数十亿个克隆进行筛选

概述

噬菌体展示是一种体外筛选技术。它可以将一系列多肽或蛋白质库展示在噬菌体颗粒的外部，而编码这些蛋白的 DNA 则位于病毒颗粒内部 (1-3)。利用展示蛋白与其编码 DNA 之间的关联，我们可以通过一种称为“生物淘选”的体外筛选方法 (4)，快速筛选出与给定靶分子（抗体、酶、细胞表面受体等）亲和结合的噬菌体展示肽。最简单的淘选方法是（见图 1）：将展示不同多肽的噬菌体库与固定在平板或小珠上的靶分子孵育，先洗去未结合的噬菌体，而后洗脱特异性结合的噬菌体，扩增洗脱下的噬菌体。重复上述结合/扩增过程，使与靶分子结合的多肽序列的噬菌体得到富集。经过 3-4轮筛选后，每个克隆通过 DNA 测序或 ELISA 鉴定克隆。
Ph.D.-7 噬菌体展示肽库试剂盒 v2 的主要原理是将随机七肽库融合表达于 M13 噬菌体次要外壳蛋白 (pIII) 的 N 端（5-9）。随机七肽和野生型 pIII 序列之间，是一个短间隔序列（Gly-Gly-Gly）。该肽库由约 109 种电转化的序列扩增一次后获得，在 10 μl 提供的噬菌体肽库中，每种序列大约100 个拷贝。
展示肽的连接形式：X7-GGG-野生型 M13 pIII
图 1：对展示于五价 pIII 蛋白上的多肽库进行淘选。
NEB代理 , 糖生物学与蛋白质工具 , 噬菌体展示
特点：
·对照淘选实验不需要封闭步骤，避免了噬菌体与塑料板发生非特异性结合；
·使用 Protein G 磁珠进行对照淘选实验，减少了繁琐的板/孔洗涤步骤；
·即用型噬菌体肽库完整试剂盒，提供了理论上所有可能出现的七肽序列（207 = 1.28 x 109）；利用表型和基因型之间的固有关联，能在单个微量滴定孔或 EP 管中对数十亿个克隆进行筛选；
·不需要辅助噬菌体进行扩增；
·利用简单的分子生物学和无菌培养技术，在不到一周的时间内筛选到特异性结合的多肽；
·提供 -96 gIII 测序引物 (500 pmol)，支持 >50 次测序反应。
注意事项
·对于 >30 天的长期储存，建议在 -80°C 条件下储存大肠杆菌 K12 ER2738。
·Protein G 磁珠应储存在 4°C，以防止因冷冻而损坏。
·原始版本 (NEB #E8100) 和新版本 (v2) 试剂盒 (NEB #E8211) 所提供的 Ph.D.-7 噬菌体展示肽库 (NEB #E8102) 完全一样。
·M13 与大多数缓冲液兼容； 然而，洗脱缓冲液可能会受到扩增所需的大肠杆菌培养条件的限制。如果使用二代测序，可以省略用于富集噬菌体库的扩增步骤。参阅最新文献以获取操作说明。
·提供的 -96 gIII 测序引物 (500 pmol) 支持 >50 次测序反应。
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1. Sidhu, S.S. (2000). Curr. Opin. Biotechnol.. 11, 610-616.
2. Rodi, D.J. and Makowski, L. (1999). Curr. Opin. Biotechnol. . 10, 87-93.
3. Wilson, D.R. and Finlay, B.B. (1998). Can. J. Microbiol.. 44, 313-229.
4. Parmley, S.F. and Smith, G.P. (1998). Gene. 73, 305-313.
5. Scott, J.K. and Smith, G.P. (1990). Science. 249, 386-390.
6. Whaley, S.R. et al. (2000). Nature. 405, 665-668.
7. Noren, K.A. and Noren, C.J. (2001). Methods. 23, 169-178.
8. Rozinov, M.N. and Nolan, G.P (1998). Chem. Biol.. 5, 713-728.
9. Rodi, D.J. et al. (1999). J. Mol. Biol.. 285, 197-203.

NEB代理 , 糖生物学与蛋白质工具 , 蛋白酶&蛋白质组分析,α1-3,4 岩藻糖苷酶,#P0769S

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α1-3,4 岩藻糖苷酶

#P0769S 200 units

识别位点

 

NEB代理 , 糖生物学与蛋白质工具 , 蛋白酶&蛋白质组分析

概述

α1-3,4 岩藻糖苷酶又称 AMF，是具有宽泛特异性的糖苷外切酶，催化寡糖和糖蛋白上的α1-3 和 α1-4 岩藻糖的水解。

来源

克隆自甜杏仁树（Prunus dulcis）并在毕赤酵母（Pichia pastoris） 中表达。

反应条件

1X GlycoBuffer 1 反应缓冲液。添加 100 μg/ml BSA，37℃ 温育。热失活：65℃ 10 分钟。

随酶提供的试剂

10X GlycoBuffer 1 反应缓冲液，100X BSA。

分子量

56,000 daltons。

质量保证

无糖苷外切酶污染，无蛋白水解活性。

浓度

4,000 units/ml。

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NEB代理 , 糖生物学与蛋白质工具 , 蛋白酶&蛋白质组分析,灰黑拟牛肝菌凝集素BGL,#P0867S

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灰黑拟牛肝菌凝集素（BGL）

#P0867S 1.0 mg

产品特点：

· 能够结合含有至少一个末端 N-乙酰葡糖胺（GlcNAc）的 N-聚糖，以及在结构中包含 Thomsen-Friedenreich 抗原（Gal-β1,3-GalNAc-α-）的 O-聚糖。

· 能够在糖组学和糖蛋白组学分析工作流程中，从复杂样品中富集末端为 N-乙酰葡糖胺（GlcNAc）的 N-聚糖或粘蛋白型 O-糖肽。

· 该酶是创新酶（Enzyme for Innovation，EFI）。创新酶工程由 NEB 发起，旨在为科学界提供独一无二的酶，从而为新的创新应用的发现创造条件。

产品说明

 灰黑拟牛肝菌凝集素（BGL）克隆自灰黑拟牛肝菌，重组表达于 E. coli 中，为 15 kDa 凝集素。BGL 具有两个独立作用的配体结合位点，位点 1 与带有 Tn 抗原（GalNAc-α-Ser/ Thr）或 Thomsen-Friedenreich 抗原（TF-抗原；Gal-β1,3-GalNAc-α-）的 O-聚糖结合；而位点 2 与末端带有 N-乙酰葡糖胺（GlcNAc）残基的 N-聚糖结合。

灰黑拟牛肝菌凝集素（BGL）结合位点

 

BGL 具有两个独立作用的配体结合位点，位点 1 与带有 Tn 抗原（GalNAc-α-Ser/ Thr）或 Thomsen-Friedenreich 抗原（TF-抗原；Gal-β1,3-GalNAc-α-）的 O-聚糖结合；而位点 2 与末端带有 N-乙酰葡糖胺（GlcNAc）残基的 N-聚糖结合。

NEB代理 , 糖生物学与蛋白质工具 , 蛋白酶&蛋白质组分析,快速PNGase F抗体标准,#P6043S

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快速PNGase F抗体标准

#P6043S 250 μg

Description

Rapid PNGase F Antibody Standard is a murine anti-MBP monoclonal antibody, isotype IgG2a. This antibody standard can be used as a positive control for Rapid PNGase F.

Supplied in
10 mM sodium phosphate (pH 7.0), 100 mM NaCl 

Apparent Molecular Weight
IgG2a is comprised of two heavy chains which are each approximately 49 KDa, as well as two light chains which are each approximately 24.4 KDa. 

Properties and Usage

Isotype

Mouse Isotype IgG2a

Source Species

murine

Storage Temperature

-20°C 

Related Products

Rapid PNGase F

IdeZ Protease (IgG-specific)

Remove-iT® Endo S

Rapid™ PNGase F (non-reducing format)

 

NEB代理 , 糖生物学与蛋白质工具 , 蛋白酶&蛋白质组分析,胰蛋白酶酶切的 BSA MS 标准,#P8108S

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产品资料 – 糖生物学与蛋白质工具 – 蛋白酶&蛋白质组分析

胰蛋白酶酶切的 BSA MS 标准

#P8108S 500 pmol

特性

 标准分子量范围：500-2,400 Da

概述

用胰蛋白酶酶切牛血清白蛋白（BSA）生成多肽复杂混合物，再用碘乙酰亚胺（Iodoacetimide）还原和烷基化（CAM 修饰）。该多肽混合物可用于校准 MALDI-TOF（基质辅助激光解吸/离子化飞行时间质谱仪）或 ESI（电喷雾电离）质谱（TOF、Q-TOF 或离子阱）。
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来源

用胰蛋白酶-ultra，质谱级（NEB #P8101）酶切 BSA（GENEBANK P02769）得到。

质量保证

本品无盐、无甘油和去污剂。

NEB代理 , 糖生物学与蛋白质工具 , 蛋白酶&蛋白质组分析,蛋白内切酶 LysC,#P8109S

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蛋白内切酶 LysC

#P8109S 20 μg

识别位点

 NEB代理 , 糖生物学与蛋白质工具 , 蛋白酶&蛋白质组分析

特性

通过质谱进行蛋白质组学分析的理想用酶

无蛋白酶污染
最适用于多肽的鉴定

概述

蛋白内切酶 LysC（flavastacin）是丝氨酸蛋白内切酶，克隆自产酶溶杆菌，能特异性切割赖氨酸羧基端的肽键。该酶是测序级酶适用于蛋白质组学和糖生物学应用。
注意：在 200 μl 双蒸水中重溶 LysC，制成 100 ng/μl 含10 mM Tris-HCl, pH 8.0 的溶液。溶液可以在 4℃ 储存几天，或者分装成一次性使用量于 -20℃ 储存几个月。

来源

提纯自产酶溶杆菌（Lysobacter enzymogenes）。

分子量

30,000 daltons。

重溶

蛋白内切酶 LysC 需溶解于 200 μl 双蒸水中制成 100 ng/μl 含10 mM Tris-HCl, pH 8.0 的溶液。快速自裂解效率随酶浓度不同而异。

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NEB代理 , 糖生物学与蛋白质工具 , 蛋白磷酸酶,Lambda 蛋白磷酸酶Lambda PP,#P0753L

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产品资料 – 糖生物学与蛋白质工具 – 蛋白磷酸酶

Lambda 蛋白磷酸酶（Lambda PP）

#P0753L 100,000 units

#P0753S 20,000 units

相关产品

p-Nitrophenyl Phosphate (PNPP)
Sodium Orthovanadate (Vanadate)

概述

Lambda 蛋白磷酸酶（Lambda PP）是一种 Mn2+ 依赖型蛋白磷酸酶，对磷酸化的丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸残基均有活性。Lambda PP 也可作用于磷酸化的组氨酸残基。

来源

重组 E. coli 菌株，携带有 Lambda 噬菌体 ORF221开放阅读框（Dr.D.Barford 惠赠）。

反应条件

1X 蛋白金属磷酸酶（PMP）缓冲液 [50 mM HEPES（pH 7.5 @ 25 ℃），100 mM NaCl，2 mMDTT 和 0.01% Brij 35] 。添加 1 mM MnCl2，30℃ 温育。
热失活：在 50 mM Na2EDTA 存在的条件下，65℃ 加热 1 小时。

随酶提供的试剂

10X 蛋白金属磷酸酶（PMP）缓冲液
10X MnCl2（10 mM）

分子量

25 kDa。

质量保证

无蛋白酶污染。

单位定义

1 单位指 50 μl 反应体系中，30℃ 条件下 1 分钟内水解 1 nmol 的对硝基苯酚磷酸盐（50mM，NEB #P0757）所需要的酶量。

浓度

400,000 units/ml。

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NEB代理 , 糖生物学与蛋白质工具 , 蛋白磷酸酶,p-Nitrophenyl Phosphate (PNPP),#P0757L

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产品资料 – 糖生物学与蛋白质工具 – 蛋白磷酸酶

p-Nitrophenyl Phosphate (PNPP)

#P0757L 5 ml

#P0757S 1 ml

Description

NEB代理 , 糖生物学与蛋白质工具 , 蛋白磷酸酶

Properties and Usage

Storage Temperature

-20°C

Molecular Weight

Theoretical: 461.4 daltons

Notes

NEB代理 , 糖生物学与蛋白质工具 , 蛋白磷酸酶

References

NEB代理 , 糖生物学与蛋白质工具 , 蛋白磷酸酶