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快速 PNGase F (非还原剂型)                             

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50次反应
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相关产品

快速PNGase F抗体标准

识别位点

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特性

 几分钟之内将抗体及融合蛋白完全去糖基化

 迅速且无偏嗜性地去除全部 N-糖苷
 贮存条件得当,可保证 12 个月的最佳活性
 经 SDS-PAGE 检测产品纯度可达到 95% 以上均一性

概述

快速 PNGase F 是经过优化的试剂,能够在几分钟之内迅速地将抗体和融合蛋白完全去糖基化。此酶能够迅速无偏嗜性地去除所有的 N-糖苷,并可直接进行下游的层析或质谱分析。快速PNGase F 简化了实验流程,可在保证灵敏度和重复性的前提下减少实验时间。针对蛋白质组学的应用而开发的快速 PNGase F(非还原剂型),在完全去除糖基化的同时保留了蛋白质的二硫键,适用于高通量蛋白质组学的应用以及利用质谱进行抗体表征分析。快速PNGase F(非还原剂型)综合了快速 PNGase F(反应速度快)的优点,同时保留了蛋白质四级结构中的非还原性状态。

 

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热失活

75℃ 10 分钟。

随酶提供的试剂

快速 PNGase F
快速 PNGase F 缓冲液(5X)
快速 PNGase F(非还原剂型)
快速 PNGase F (非还原剂型)缓冲液(5X)

特异性

快速 PNGase F 可以从抗体及其相关蛋白上去除所有复合型、杂合型及高甘露糖型糖链。如果核心结构上有α1-3 岩藻糖(经常出现于植物及昆虫细胞中表达的免疫球蛋白上),PNGase F及快速 PNGase F 就都不能切割。

质量保证

 无糖苷外切酶污染,无糖苷内切酶F1、F2 和 F3 活性,无蛋白水解活性。

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O-糖苷酶                             

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相关产品

O-糖苷酶 & 神经氨酸苷酶套装
α2-3,6,8 神经氨酸苷酶

识别位点

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特性

 从糖蛋白上切割 O-连接二糖结构,核心 1 和核心 3 结构
 更多详细结构特异性请翻阅目录 258 页

概述

O-糖苷酶即内切-α-N-乙酰半乳糖胺酶,催化切割糖蛋白上 O-连接二糖结构,核心 1 和核心3 结构。

来源

基因克隆自粪肠球菌(Enterococcus faecalis),在 E. coli 表达。

随酶提供的试剂

10X 糖蛋白变性缓冲液
10X GlycoBuffer 2 反应缓冲液
10% NP-40

分子量

147,000 daltons。

质量保证

无糖苷外切酶污染,无蛋白水解活性。

单位定义

1 单位指 100 μl 反应体系中,37℃ 条件下,1 小时从 5 mg 神经氨酸苷酶酶解后的非变性胎球蛋白中切除 0.68 nmol O-连接二糖单位所需要的酶量(1 unit 的 O-糖苷酶和 PNGase F 可以分别移除等摩尔的 O-连接二糖单位和 N-连接寡糖)。

浓度

40,000,000 units/ml。

热失活

 65℃ 10 分钟。

注意事项

如果有唾液酸存在,先去除唾液酸。

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糖苷内切酶 S                             

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6,000 units
2,319.00

      


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特性

 从野生型 IgG 移除 N-连接糖
 用于检测 N-糖基化位点
 更多详细结构特异性请翻阅 232 页

概述

糖苷内切酶 S 是一种高度特异性糖苷内切酶,可以从野生型 IgG 重链的壳二糖核心结构之间切除 N-连接糖。糖苷内切酶 S 携带有几丁质结合域(CBD)标签,易于从反应中去除。以不含甘油的形式提供,便于在 HPLC 和 MS 分析中取得最佳效果。

来源

糖苷内切酶 S 基因克隆自酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes),与几丁质结合域融合,在 E. coli 中高度表达。

随酶提供的试剂:

10X GlycoBuffer 1 反应缓冲液

分子量

136,000 daltons。

质量保证

无糖苷外切酶污染,无蛋白水解活性。

单位定义

在 1X GlycoBuffer 2 反应缓冲液中,5 μgIgG 与两倍稀释的 Remove-iT 糖苷内切酶 S 37℃ 温育 1 小时。通过 SDS-PAGE 观察反应产物分离。

浓度

200,000 units/ml。

热失活

55℃ 10 分钟。

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糖苷内切酶 D                             

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#P0742L
7,500 units
9,549.00

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1,500 units
2,409.00

      


识别位点

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X=(H 或寡糖)

特性

 从糖蛋白和糖肽链上切除寡甘露糖 N-连接糖链
 适用于 N-糖基化位点的确定

概述

糖苷内切酶 D 又称 Endo D,是重组糖苷内切酶,能够从糖蛋白和糖肽链上切除寡甘露糖 N-连接糖链,无论糖支链有无延伸,切割位点位于壳二糖核心结构之间。
糖苷内切酶 D 携带有几丁质结合域(CBD)标签,易于从反应中去除。以不含甘油的形式提供,便于在 HPLC 和 MS 分析中取得最佳效果。

来源

糖苷内切酶 D 的截短基因克隆自肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)并在 E. coli 中作为融合有几丁质结合域的蛋白高度表达。

随酶提供的试剂:

10X DTT
10X GlycoBuffer 2 反应缓冲液

分子量

140,000 daltons。

质量保证

无糖苷外切酶污染,无蛋白水解活性。

单位定义

1 单位指 10 μl 的反应体系中,37℃ 条件下,1 小时从 10 μg 经糖苷酶切割后的(具有三个甘露糖核心结构)胎球蛋白中除去超过 95% 的碳水化合物所需要的酶量。

浓度

50,000 units/ml。

热失活

65℃ 10 分钟。

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糖苷内切酶 F3                             

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240units
2,389.00

      


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特性

 从糖蛋白和糖肽链上切除复杂二、三支链 N-连接糖原

 用于检测 N-糖基化位点

概述

糖苷内切酶 F3 是一种具有高度特异性的重组糖苷内切酶,能够从糖蛋白和糖肽链上切除与天冬酰胺连接的复杂二、三支链型寡糖链,寡糖链核心结构上可以被岩藻化,切割位点位于壳二糖核心结构之间。糖苷内切酶 F3 携带有几丁质结合域(CBD)标签,易于从反应中去除。以不含甘油的形式提供,便于在 HPLC 和 MS 分析中取得最佳效果。

来源

糖苷内切酶 F3 克隆自和平空间站伊丽莎菌(Elizabethkingia miricola,formerly Flavobacterium

meningosepticum)并在 E. coli 中高度表达。

随酶提供的试剂

 10X GlycoBuffer 4 反应缓冲液

分子量

 38,800 daltons

质量保证

 无糖苷外切酶污染,无蛋白水解活性。

单位定义

 1 单位指 10 μl 的反应体系中,37℃ 条件下,1 小时从 10 μg 猪纤维蛋白原中除去超过95% 的碳水化合物所需要的酶量。

浓度

 8,000 units/ml

热失活

 65℃ 10 分钟。

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糖苷内切酶 F2                             

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#P0772S
480 units
2,619.00

      


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特性

 从糖蛋白和糖肽链上切除复杂二支链 N-连接糖原

 

 用于检测 N-糖基化位点

概述

糖苷内切酶 F2 是一种具有高度特异性的重组糖苷内切酶,能够从糖蛋白和糖肽链上切除与天冬酰胺连接的复杂二支链型糖链和高甘露糖链,切割位点位于壳二糖核心结构之间。该酶切割二支链型糖链的速度是切割高甘露糖链的 20倍。核心结构上有无岩藻糖,对切割二支链型糖链的活性无任何影响。但是该酶不能切割杂合型或者有三、四支链糖链。糖苷内切酶 F2 携带有几丁质结合域(CBD)标签,易于从反应中去除。以不含甘油的形式提供,便于在 HPLC 和 MS分析中取得最佳效果。

来源

糖苷内切酶 F2 克隆自和平空间站伊丽莎菌(Elizabethkingia miricola,formerly Flavobacterium
meningosepticum)并在 E. coli 中高度表达。

随酶提供的试剂:

 10X GlycoBuffer 4 反应缓冲液

分子量

 39,800 daltons。

质量保证

 无糖苷外切酶污染,无蛋白水解活性。

单位定义

1 单位指 10 μl 的反应体系中,37℃ 条件下,1 小时从 10 μg 猪纤维蛋白原中除去超过95% 的碳水化合物所需要的酶量。

浓度

8,000 units/ml。

热失活

 65℃ 10 分钟。

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Endoglycoceramidase I (EGCase I)                             

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#P0773S
150 milliunits
899.00

      

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特性

  Catalyzes the hydrolysis of the β-glycosidic linkage between oligosaccharides and ceramides in

     various glycosphingolipids.

  Oligosaccharide and ceramide remain intact, leaving them suitable for further analysis. 

  This is an Enzyme for Innovation (EFI). EFI is a project initiated by NEB to provide unique enzymes to

     the scientific community in the hopes of enabling the discovery of new and innovative applications.

    These enzymes have interesting properties and unique specificities.

概述

Endoglycoceramidase I (EGCase I) catalyzes the hydrolysis of the β-glycosidic linkage between

oligosaccharides and ceramides in various glycosphingolipids. The enzyme leaves the oligosaccharide

and ceramide intact, keeping them suitable for further analysis. The enzyme efficiently releases

oligosaccharides from ganglio- and globo-type glycosphingolipids, certain type of cerebrosides

(glucosylcerebrosides), and exhibits low activity towards galactocerebrosides (See Reference 1,

FAQ #3). EGCase I does not hydrolyze sulfatides nor psychosine. 

来源

EGCase I is isolated from a strain of E. coli, which contains the cloned EGCase I gene from Rhodococcus triatomea.

反应条件

 1X EGCase I Reaction Buffer. Incubate at 37°C

随酶提供

10X EGCase I Reaction Buffer

 

1X EGCase I Reaction Buffer
0.1% Triton® X-100
50 mM sodium acetate
(pH 5.2 @ 25°C)

分子量

Apparent: 50 kDa

单位定义

One unit of R. triatomea EGCase I was defined as the amount of enzyme required to hydrolyze 1 μmol of

ganglioside GM1a per minute at 37°C.

 

Unit Assay Conditions
Two fold dilutions of EGCase I are incubated with 10 nmoles of GM1a substrate in 1X EGCase I Reaction

Buffer in a 10 µl reaction. The reaction mix is incubated for 5 minutes at 37°C. Released glycans are

labeled with 2-AB, and reaction products are analyzed by ultra-performance hydrophilic interaction liquid

chromatography with fluorescence detection.

热失活

65°C for 20 min.

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 1. Albrecht, S. et al. (2016). Analytical Chemistry. 88, 4795-4802.

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胎球蛋白                             

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#P6042S
500 μg
889.00

      


概述

胎球蛋白是一种糖蛋白,它包含有唾液酸化的 N-连接和 O-连接的糖链,用作糖苷内切酶的阳性对照。

来源

胎牛血清。

分子量

64 kDa。

浓度

10 mg/ml。

注意事项

500 μg 足够用于约 20 次反应。由于糖基化的多样性,胎球蛋白会在 SDS-PAGE 胶上表现出两条非常相近的条带。

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蛋白去糖基化混合液II                             

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#P6044S
20 rxns
6,399.00

      


特性

 可快速建立反应
 混合糖苷酶有效去除 N-及 O-连接糖链
 可用于变性及非变性反应条件
 去糖基化后留下完整核心结构适用于后续研究

概述

蛋白去糖基化混合液 II 中包含五种糖苷酶、试剂和对照,能切割所有 N-连接糖链及简单 O-连接糖链,也能切割部分复杂 O-连接糖链。试剂盒中的酶能用于 20 次反应,作用于 2 mg 糖蛋白。
 
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小牛胎球蛋白在酶作用下去糖基化,非变性条件使用 10X 去糖基化混合液 1,变性条件使用 10X 去糖基化混合液 2。20 μg 反应产物上样于 10-20% Tris-glycineSDS-PAGE 胶上。泳道 1:彩色预染蛋白标准(11-245kDa)(NEB #P7712);泳道 2:20 μg 未去糖基化的胎球蛋白对照;泳道 3:20 μg 胎球蛋白使用去糖基化混合液 1 在非变性条件下去糖基化;泳道 4:20 μg胎球蛋白使用去糖基化混合液 2 在变性条件下去糖基化;泳道 5:5 μl 蛋白去糖基化酶混合液 II。

随酶提供的试剂

去糖基化混合液 1(10X)
去糖基化混合液 2(10X)

去糖基化酶混合液II

PNGase F(无甘油),重组酶:10,000 units/支
O-糖苷酶:80,000 units/支
α2-3,6,8,9 神经氨酸苷酶 A:400 units/支
β1-4 半乳糖苷酶 S:960 units/支
β-N-乙酰己糖胺酶f:300 units/支

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RNase B(对照底物)                             

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#P7817S
250 μg
739.00

      


概述

RNase B是一种高甘露糖蛋白,可作为糖苷内切酶切割N-连接糖链的阳性对照。RNase B有一个N-连接糖基化位点,可以用于SDS-PAGE凝胶电泳分析。

来源

牛胰

贮存溶液

Milli-Q

分子量

17,000 Da(去糖基后13,683 Da)

RNase B去糖操作步骤

1. 10 μl 反应体系中,加入2 μl 的RNase B1μl 10X糖蛋白变性缓冲液和 5 μl H2O。
2. 于100°C煮沸 10分钟。
3. 加入1 μl 10X GlycoBuffer 2反应缓冲液和 1 μl 10% NP-40。
4. 加入1 μl糖苷内切酶。
5. 37°C温育 1小时。
6. 将反应产物上样于10-20%的 SDS-PAGE胶。

注意事项

250 μg足够用于约20次反应。

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    1.    Plummer, T.H. and Hirs, C. (1964). J. Biol. Chem. 239, 2530-2538.
    2.    Plummer, T.H. Jr., Tarentino, A. and Maley, F. (1968). J. Biochem. (Tokyo). 243, 5158-5164. 
 3.    Liang, C.-J. Yamashita, K. and Kobata, A. (1980). J. Biochem (Tokyo). 88, 51-58.