水产品中土霉素、四环素、金霉素和多西环素残留量的测定 UPLC-MSMS法 (GB 31656.11-2021) 解决方案

发表于2022年7月26日由上海金畔生物科技有限公司

参考《GB 31656.11-2021 食品安全国家标准水产品中土霉素、四环素、金霉素和多西环素残留量的测定》

2022年《国家食品安全监督抽检实施细则》(简称国抽)与2021年相比，水产品项下淡水虾、海水鱼、海水虾的检验项目中新增了GB 31656.11(第二法)液相色谱-串联质谱法，同时，在3.5.2.5中指定其为2022年2月1日(含)起的指定检验方法。《GB 31656.11-2021 食品安全国家标准水产品中土霉素、四环素、金霉素和多西环素残留量的测定》为2021年9月16日发布的中华人民共和国农业农村部公告第388号36项食品安全国家标准之一。

迪马科技参考GB 31656.11-2021标准，建立了SPE-UPLC-MS/MS法测定水产品中4种四环素类药物残留量检测的方法，利用Mcllvaine缓冲液(pH 4.0)提取，ProElut PLS净化，Leapsil C18色谱柱分离检测；定量限与标准方法一致，为10.0 μg/kg；回收率在70%-110%之间。
本方案具有提取方法简单、回收率高、净化效果优异、方法稳定性好等优点，适用于各省市出入境、质检、疾控、食品药品检验所、第三方检测机构、食品检测机构、大型食品生产商、高校和科研院所等参考。

水产品中土霉素、四环素、金霉素和多西环素残留量的测定 UPLC-MS/MS法解决方案

1、适用范围

本方案适用于鱼、虾、蟹、鳖及海参等水产品可食组织中土霉素、四环金、金霉素和多西环素残留量的检测。

2、标准品配制

1. 单标储备液：分别称取适量盐酸四环素、盐酸土霉素、盐酸金霉素及盐酸多西环素，用甲醇配制成1.0 mg/mL的单标储备液；

2. 混合标准中间液：分别吸取适量单标储备液，用甲醇配制成1.0 μg/mL和0.1 μg/mL的中间液。

3、提取

1. 取2.0 g样品于50 mL离心管中，加入6 mL Na₂EDTA-Mcllvaine缓冲液*和2 mL乙酸铅溶液*，涡旋混合1 min，超声10 min，8000 rpm离心2 min；

2. 取出上清液，残渣分别用Na2EDTA- Mcllvaine缓冲液5 mL提取两次；

3. 合并三次提取液，并用Na₂EDTA-Mcllvaine缓冲液定容至20 mL；

4. 加入10 mL正己烷，涡旋混合1 min，8000 rpm离心2 min，取下层清液10 mL待净化。

* Na₂EDTA-Mcllvaine缓冲溶液(pH 4.0)：称取磷酸氢二钠(Na₂HPO₄·12H₂O) 27.6 g、柠檬酸(C₆H₈O₇·H₂O) 12.9 g、乙二胺四乙酸二钠盐

37.2 g，用水溶解后稀释并定容至1000 mL。

* 乙酸铅溶液：称取20 g乙酸铅，用水定容至1000 mL。

4、净化——ProElut PLS 60 mg/3 mL (Cat.#: 68003)

(1)活化：	依次用5 mL甲醇、5 mL水活化；
(2)上样：	加入待净化液，弃去流出液；
(3)淋洗：	依次用5 mL 水、5 mL 5%甲醇水淋洗，弃去流出液，小柱真空负压抽干5 min；
(4)洗脱：	加入5 mL 乙酸乙酯-甲醇(1:9)溶液，推干小柱，接收全部流出液混匀；
(5)重新溶解：	将流出液在45 ℃下氮吹近干，用初始流动相定容至1 mL，过Nylon膜(Cat.#: 37177)，供LC-MS/MS分析。

注：同方法制备基质匹配标准溶液。

5、分析条件

UPLC 条件

色谱柱：Leapsil C18, 100 x 2.1 mm 2.7 μm (Cat#：86005)

流速：0.2 mL/min 进样量：5 μL 柱温：35 ℃

流动相：A：0.1%甲酸水溶液 B：乙腈

梯度设置

时间/Min.	0	0.5	3.5	4	6	7
A(%)	90	90	80	10	10	90
B(%)	10	10	20	90	90	10

质谱条件

电离模式：ESI	扫描方式：正离子扫描
检测方式：多反应监测	电喷雾电压：5500 V
雾化气压力：50 psi	辅助气压力：50 psi
气帘气压力：20 psi	离子源温度：500 ℃

定性离子对、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压见下表

药物名称	定性离子对 (m/z) (母离子/子离子)	定量离子对 (m/z) (母离子/子离子)	DP	CE
四环素	445.2/410.2	445.2/410.2	83	25
	445.2/427.3			17
土霉素	461.3/426.1	461.3/426.1	78	25
	461.3/443.3			17
金霉素	479.2/444.2	479.2/444.2	84	27
	479.2/462.2			23
多西环素	445.2/428.1	445.2/428.1	79	23
	445.2/410.2			33

6、添加回收结果

龙利鱼中土霉素、四环素、金霉素和多西环素检测的添加回收结果(%)

目标物	添加水平10.0 μg/kg 加标量：混合中间液 0.1 μg/mL, 加200 μL	添加水平100.0 μg/kg 加标量：混合中间液 1.0 μg/mL, 加200 μL	基质效应
四环素	93%	89%	113%
土霉素	104%	89%	115%
金霉素	86%	83%	93%
多西环素	83%	85%	78%

草鱼中土霉素、四环素、金霉素和多西环素检测的添加回收结果(%)

目标物	添加水平10.0 μg/kg 加标量：中间液 0.1 μg/mL, 加200 μL	添加水平100.0 μg/kg 加标量：中间液 1.0 μg/mL, 加200 μL	基质效应
四环素	108%	82%	94%
土霉素	92%	87%	109%
金霉素	98%	78%	70%
多西环素	97%	82%	60%

海水虾中土霉素、四环素、金霉素和多西环素检测的添加回收结果(%)

目标物	添加水平10.0 μg/kg 加标量：混合中间液 0.1 μg/mL, 加200 μL	添加水平100.0 μg/kg 加标量：混合中间液 1.0 μg/mL, 加200 μL	基质效应
四环素	84%	85%	124%
土霉素	96%	95%	107%
金霉素	86%	82%	79%
多西环素	84%	87%	74%

淡水虾中土霉素、四环素、金霉素和多西环素检测的添加回收结果(%)

目标物	添加水平10.0 μg/kg 加标量：中间液 0.1 μg/mL, 加200 μL	添加水平100.0 μg/kg 加标量：中间液 1.0 μg/mL, 加200 μL	基质效应
四环素	109%	93%	62%
土霉素	82%	98%	52%
金霉素	91%	86%	33%
多西环素	96%	89%	31%