Epothilone A是类似Taxol的microtubule（微管）稳定剂，EC0.01为2 μM。

靶点

微管蛋白

IC50

2 μM (EC0.01)

体外研究

Epothilone A是在粘杆菌Sorangium cellulosum中发现的,是类似紫杉醇的微管稳定剂，诱导微管蛋白聚合, 导致细胞周期停在G2-M期, 产生毒性，也诱导凋亡。Epothilone A的 EC0.01值 为2 μM。 Epothilone A 作用于HCT116细胞，有效抑制细胞增殖，IC50为 4.4 nM。Epothilone A 作用于KB3-1, KBV-1, Hela,和 Hs578T细胞，具有细胞毒性，IC50为13 nM到160 nM。Epothilone A比紫杉醇水溶性强，Epothilone A与紫杉醇竞争性与微管结合， IC50为 2.3 μM。然而, Epothilone A和Taxol并不共享一个药效团，他们独立且特异利用各自微管蛋白结合袋。最新发现Aspergillus niger AS 3.739 引起的Epothilone A微生物转化产生一些代谢物，对MCF-7细胞具有毒性，但是具有非常高的 IC50 值。

特征

Epothilone A是类似紫杉醇的抗癌常规化合物，诱导微管蛋白聚合。

埃博霉素B；帕土匹龙

MB6782

埃博霉素C

MB1821

埃博霉素D

MB5056

伊沙匹隆；Azaepothilone B

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.0257 mL

10.1284 mL

20.2569 mL

5 mM

0.4051 mL

2.0257 mL

4.0514 mL

10 mM

0.2026 mL

1.0128 mL

2.0257 mL

50 mM

0.0405 mL

0.2026 mL

0.4051 mL

微管蛋白聚合实验:
纯化牛脑微管蛋白(MTP), 包含约15%–20%微管相关蛋白。 用于 Epothilone A-微管研究的buffer (MES buffer)含 0.1 M 2-吗啉乙磺酸(MES), 1 mM EGTA, 0.5 mM MgCl2, 和3 M 甘油，pH 为6.6。电子显微镜观察的样本置于碳覆盖火棉胶片包被的网格上 (300 个网孔)，用2%乙酸铀酰进行负染色。在有或无Epothilone A存在时，使用分光光度计和恒温调节液体循环器。检测微管装配。温度维持在 35oC，350 nm处检测到变浑浊状态(代表聚合物规模)。计算EC0.01。

细胞实验

• Cell lines: KB3-1, KBV-1, Hela, 和 Hs578T细胞
• Concentrations: 0–2 μM
• Incubation Time: 24 小时测定有丝分裂停顿，72 小时测定细胞毒性。
• Method: 为了测定有丝分裂受阻和畸变，细胞接种在48孔板中(用台酚蓝染色，测定细胞数) 或置于盖玻片上。24 小时后,用 Epothilone A处理细胞，在固定时间间隔记录。为了分析毒性, 测定细胞数，用台酚蓝染色记录阳性和阴性。同时, 盖玻片和培养基上清液中等分的细胞混合，用溶于PBS的Hoechst 33342 染色。在有丝分裂受阻（停在G2-M期）和畸变的时候记录细胞。