Staurosporine是一种有效的PKC抑制剂，在无细胞试验中作用于PKCα，PKCγ 和PKCη，IC50分别为2 nM，5 nM 和 4 nM，对PKCδ(20 nM)和PKCε(73 nM作用较弱，对PKCζ (1086 nM)的活性很低。同时 对其他的激酶PKA, PKG, S6K, CaMKII, 等也显示抑制活性。

靶点

体外研究

Staurosporine 也强抑制HeLa S3细胞，IC50为4 nM。Staurosporine 也抑制多种其他蛋白激酶，包括PKA, PKG, 磷酸激酶, S6 激酶, 肌球蛋白轻链激酶(MLCK), CAM PKII, cdc2, v-Src, Lyn, c-Fgr, 和Syk ， IC50分别为 15 nM, 18 nM, 3 nM, 5 nM, 21 nM, 20 nM, 9 nM, 6 nM, 20 nM, 2 nM, 和 16 nM。Staurosporine (1 μM) 诱导 PC12细胞90%以上凋亡,这种作用可被过量表达的Bcl-2抑制,或者zVAD-fmk, cycloheximide (10 μM) 及actinomycin D (5 μM)处理也可抑制。相应地, Staurosporine处理，诱导细胞内游离钙水平 [Ca2+]i快速且持久的提升，线粒体活性氧（ROS）的积累,及 随后的线粒体功能障碍。通过caspase-8激活和Bid 分裂，功能性caspase-3的表达可增强Staurosporine诱导MCF7细胞死亡。1 μM Staurosporine处理，只部分抑制IL-3刺激的Bcl2 磷酸化，而完全阻断PKC调节的 Bcl2磷酸化。Staurosporine 诱导人类包皮成纤维细胞AG-1518凋亡,根据溶酶体组织蛋白酶D调节的 细胞色素 c释放和 caspase 激活。除了激活传统线粒体凋亡通路, Staurosporine触发一种新型内在凋亡通路, 依赖Apaf-1存在时对caspase-9的激活。

体内研究

在局部贫血前，使用Staurosporine(0.1-10 ng)预处理局部贫血沙鼠和大鼠模型，可防止神经元损伤，这种作用存在剂量依赖性，说明CAl锥体细胞死亡涉及PKC。

Enzastaurin (LY317615)

MB4601

Go 6983

MB4599

Sotrastaurin

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.1435 mL

10.7174 mL

21.4348 mL

5 mM

0.4287 mL

2.1435 mL

4.2870 mL

10 mM

–

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–

50 mM

–

–

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酶测定和结合测定：
蛋白激酶C在含有5μmolTris/ HCl，pH7.5,2.5μmol乙酸镁，50μg组蛋白II S，20μg磷脂酰丝氨酸，0.88μg二油精，125nmol的反应混合物（0.25mL）中测定。 CaCl 2,1.25nmol [γ-32] ATP（5-10×104cpm / nmol）和5μg部分纯化的酶。 确定[3H] PDBu与蛋白激酶C的结合：反应混合物（200μL含有4μmol的Tris /苹果酸盐，pH6.8,20μmol的KCl，30nmol的CaCl2,20μg的磷脂酰丝氨酸，5μg的部分纯化的 蛋白激酶C，0.5％（终浓度）DMSO，10pmol [3H] PDBu（1-3×104cpm / pmol）和10μL各种量的星形孢菌素。

细胞实验

• Cell lines: PC12
• Concentrations: 溶于DMSO,终浓度为1 μM
• Incubation Time: ~32 小时
• Method: 使用Staurosporine处理细胞32小时。细胞在4%多聚甲醛中混合，然后使用DNA结合染料Hoechst 33342染色。在荧光照明下观察细胞，测定凋亡细胞百分数。

动物实验

• Animal Models: 短暂局部贫血的雄性Mongolian沙鼠或雄性 Wistar大鼠
• Formulation: 溶于DMSO,然后在盐水中稀释
• Dosages: ~10 ng
• Administration: 定向处理到海马双边CA1子域