Zibotentan (ZD4054)是一种特异性的Endothelin (ET)A拮抗剂，IC50为21 nM，对ETB没有抑制活性。Phase 3。

靶点

ET-A  21 nM

体外研究

在人和大鼠平滑肌细胞中，Zibotentan特异性抑制ETA介导的抗凋亡作用，但是对ETB介导的促凋亡作用没有影响，Zibotentan以高亲和力结合于内皮素A受体(ETA)，Ki为13 nM，而对内皮素B受体(ETB)没有亲和力，IC50>10 μM。在分泌ET-1，并表达ETA 与 ETB mRNA的卵巢癌细胞系HEY和OVCA 433中，1 μM Zibotentan处理抑制ET-1诱导的促有丝分裂活性。ZD4054 (1 μM)抑制HEY和OVCA 433细胞中ET-1诱导的EGFR反式激活。HEY和OVCA 433细胞中，通过增强E-钙粘蛋白的表达和启动子活性，并抑制血管内皮生长因子(VEGF)分泌与侵袭，Zibotentan (1 μM)逆转ET-1介导的上皮-间质转化(EMT)。Zibotentan也能有效抑制SKOV-3和A-2780细胞中基础和ET-1诱导的细胞增殖，这与AKT和p42/44MAPK磷酸化的抑制相关，也与通过bcl-2的抑制和caspase-3与聚(ADP-核糖)聚合酶蛋白质的激活，导致细胞凋亡增加相关。

体内研究

Zibotentan(10 mg/kg/day)给药21天有效抑制小鼠体内69%的HEY卵巢癌异种移植物的生长，而没有相关毒性，这与37% Ki-67表达和62%肿瘤诱导的血管形成被抑制表明的细胞增殖被阻断相关。同样地，Zibotentan治疗显著抑制基质金属蛋白酶-2 (MMP-2)和VEGF的表达，以及p42/44 MAPK与EGFR的活化，并有效增强E-钙粘蛋白的表达。

马西替坦;ACT064992

MB1887

西他塞坦钠/司他生坦钠

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.3561 mL

11.7805 mL

23.5610 mL

5 mM

0.4712 mL

2.3561 mL

4.7122 mL

10 mM

0.2356 mL

1.1781 mL

2.3561 mL

50 mM

0.0471 mL

0.2356 mL

0.4712 mL

受体结合试验:
Zibotentan (不同浓度)对125碘-ET-1与克隆人ETA的结合的抑制使用放射性配体结合技术评估。人重组ETA在小鼠红白血病细胞中表达，制备细胞膜用于竞争性结合研究，使用125碘-ET-1作为放射性配体。培育在Zibotentan存在下重复3份进行，100 pM 至100 μM处于半对数增量，ET-1结合的抑制表示为具有95%置信区间(CI)的几何平均数pIC50值(抑制50%结合的浓度)。在进一步受体结合筛选中，利用在三个独立研究中测定的更多数量的浓度-响应曲线，使用Cheng和Prusoff方程确定平衡解离常数(Ki)，评估Zibotentan对克隆人ETA的亲和力。

细胞实验：

• Cell lines: HEY 和 OVCA 433
• Concentrations: 溶于DMSO，终浓度为1 μM
• Incubation Time: 48小时
• Method: 将细胞在无血清的DMEM中血清饥饿培养24小时，然后暴露于Zibotentan 下48小时。处理后，将细胞裂解，回收上清液，分析组氨酸相关的DNA片段，在405 nm下使用酶标仪读取数据。收集漂浮和贴壁的细胞，检测早期细胞的凋亡。细胞通过FITC偶联的膜联蛋白V和碘化丙啶使用Vybrant细胞凋亡试剂盒双重着色，并通过流式细胞分析法立即分析。

动物实验：

• Animal Models: 负荷已生长的HEY人卵巢癌异种移植物的雌性无胸腺(nu+/nu+)小鼠
• Formulation: 溶于DMSO，在PBS中稀释
• Dosages: 10 mg/kg/day
• Administration: 腹腔注射