介绍

用于RT-PCR的*链合成系统进行了优化以合成*链cDNA，从纯化的poly（A）+或总RNA。这个系统可以检测RNA的目标从100个基点，至12 KB。的起始材料的量，可以改变从1微克到5微克的总RNA。逆转录酶是一个版本的M-MLV逆转录，已设计，以减少RNase H活性，并提供增强的热稳定性。使用酶cDNA的合成在42-55℃下的温度范围内，提供更高的特异性，高产量的cDNA，和更完整长度的产品比其他的逆转录酶。用于RT由于合成系统还没有显着地抑制核糖体和转移RNA，它可用于从总RNA制备*链cDNA的合成。

在*步骤中，使用总RNA或聚（A）+选择的引物用寡聚（dT），随机引物，或一个基因特异性引物的RNA进行cDNA合成。在第二步骤中，在一个单独的管，使用感兴趣的基因的特异性引物进行PCR。