参考《GB 31656.11-2021 食品安全国家标准 水产品中土霉素、四环素、金霉素和多西环素残留量的测定》
2022年《国家食品安全监督抽检实施细则》(简称国抽)与2021年相比，水产品项下淡水虾、海水鱼、海水虾的检验项目中新增了GB 31656.11(第二法)液相色谱-串联质谱法，同时，在3.5.2.5中指定其为2022年2月1日(含)起的指定检验方法。《GB 31656.11-2021 食品安全国家标准 水产品中土霉素、四环素、金霉素和多西环素残留量的测定》为2021年9月16日发布的中华人民共和国农业农村部公告 第388号36项食品安全国家标准之一。
迪马科技参考GB 31656.11-2021标准，建立了SPE-UPLC-MS/MS法测定水产品中4种四环素类药物残留量检测的方法，利用Mcllvaine缓冲液(pH 4.0)提取，ProElut PLS净化，Leapsil C18色谱柱分离检测；定量限与标准方法一致，为10.0 μg/kg；回收率在70%-110%之间。
本方案具有提取方法简单、回收率高、净化效果优异、方法稳定性好等优点，适用于各省市出入境、质检、疾控、食品药品检验所、第三方检测机构、食品检测机构、大型食品生产商、高校和科研院所等参考。
水产品中土霉素、四环素、金霉素和多西环素残留量的测定 UPLC-MS/MS法 解决方案
1、适用范围
本方案适用于鱼、虾、蟹、鳖及海参等水产品可食组织中土霉素、四环金、金霉素和多西环素残留量的检测。
2、标准品配制
1. 单标储备液：分别称取适量盐酸四环素、盐酸土霉素、盐酸金霉素及盐酸多西环素，用甲醇配制成1.0 mg/mL的单标储备液；
2. 混合标准中间液：分别吸取适量单标储备液，用甲醇配制成1.0 μg/mL和0.1 μg/mL的中间液。
3、提取
1. 取2.0 g样品于50 mL离心管中，加入6 mL Na2EDTA-Mcllvaine缓冲液*和2 mL乙酸铅溶液*，涡旋混合1 min，超声10 min，8000 rpm离心2 min；
2. 取出上清液，残渣分别用Na2EDTA- Mcllvaine缓冲液5 mL提取两次；
3. 合并三次提取液，并用Na2EDTA-Mcllvaine缓冲液定容至20 mL；
4. 加入10 mL正己烷，涡旋混合1 min，8000 rpm离心2 min，取下层清液10 mL待净化。
* Na2EDTA-Mcllvaine缓冲溶液(pH 4.0)：称取磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O) 27.6 g、柠檬酸(C6H8O7·H2O) 12.9 g、乙二胺四乙酸二钠盐
37.2 g，用水溶解后稀释并定容至1000 mL。
* 乙酸铅溶液：称取20 g乙酸铅，用水定容至1000 mL。
4、净化——ProElut PLS 60 mg/3 mL (Cat.#: 68003)
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(1)活 化： |
依次用5 mL甲醇、5 mL水活化； |
|
(2)上 样： |
加入待净化液，弃去流出液； |
|
(3)淋 洗： |
依次用5 mL 水、5 mL 5%甲醇水淋洗，弃去流出液，小柱真空负压抽干5 min； |
|
(4)洗 脱： |
加入5 mL 乙酸乙酯-甲醇(1:9)溶液，推干小柱，接收全部流出液混匀； |
|
(5)重新溶解： |
将流出液在45 ℃下氮吹近干，用初始流动相定容至1 mL，过Nylon膜(Cat.#: 37177)，供LC-MS/MS分析。 |
注：同方法制备基质匹配标准溶液。
5、分析条件
UPLC 条件
色谱柱：Leapsil C18, 100 x 2.1 mm 2.7 μm (Cat#：86005)
流 速：0.2 mL/min 进样量：5 μL 柱 温：35 ℃
流动相：A：0.1%甲酸水溶液 B：乙腈
梯度设置
|
时间/Min. |
0 |
0.5 |
3.5 |
4 |
6 |
7 |
|
A(%) |
90 |
90 |
80 |
10 |
10 |
90 |
|
B(%) |
10 |
10 |
20 |
90 |
90 |
10 |
质谱条件
|
电离模式：ESI |
扫描方式：正离子扫描 |
|
检测方式：多反应监测 |
电喷雾电压：5500 V |
|
雾化气压力：50 psi |
辅助气压力：50 psi |
|
气帘气压力：20 psi |
离子源温度：500 ℃ |
定性离子对、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压见下表
|
药物名称 |
定性离子对 (m/z) (母离子/子离子) |
定量离子对 (m/z) (母离子/子离子) |
DP |
CE |
|
四环素 |
445.2/410.2 |
445.2/410.2 |
83 |
25 |
|
445.2/427.3 |
17 |
|||
|
土霉素 |
461.3/426.1 |
461.3/426.1 |
78 |
25 |
|
461.3/443.3 |
17 |
|||
|
金霉素 |
479.2/444.2 |
479.2/444.2 |
84 |
27 |
|
479.2/462.2 |
23 |
|||
|
多西环素 |
445.2/428.1 |
445.2/428.1 |
79 |
23 |
|
445.2/410.2 |
33 |
6、添加回收结果
龙利鱼中土霉素、四环素、金霉素和多西环素检测的添加回收结果(%)
|
目标物 |
添加水平10.0 μg/kg 加标量：混合中间液 0.1 μg/mL, 加200 μL |
添加水平100.0 μg/kg 加标量：混合中间液 1.0 μg/mL, 加200 μL |
基质效应 |
|
四环素 |
93% |
89% |
113% |
|
土霉素 |
104% |
89% |
115% |
|
金霉素 |
86% |
83% |
93% |
|
多西环素 |
83% |
85% |
78% |
草鱼中土霉素、四环素、金霉素和多西环素检测的添加回收结果(%)
|
目标物 |
添加水平10.0 μg/kg 加标量：中间液 0.1 μg/mL, 加200 μL |
添加水平100.0 μg/kg 加标量：中间液 1.0 μg/mL, 加200 μL |
基质效应 |
|
四环素 |
108% |
82% |
94% |
|
土霉素 |
92% |
87% |
109% |
|
金霉素 |
98% |
78% |
70% |
|
多西环素 |
97% |
82% |
60% |
海水虾中土霉素、四环素、金霉素和多西环素检测的添加回收结果(%)
|
目标物 |
添加水平10.0 μg/kg 加标量：混合中间液 0.1 μg/mL, 加200 μL |
添加水平100.0 μg/kg 加标量：混合中间液 1.0 μg/mL, 加200 μL |
基质效应 |
|
四环素 |
84% |
85% |
124% |
|
土霉素 |
96% |
95% |
107% |
|
金霉素 |
86% |
82% |
79% |
|
多西环素 |
84% |
87% |
74% |
淡水虾中土霉素、四环素、金霉素和多西环素检测的添加回收结果(%)
|
目标物 |
添加水平10.0 μg/kg 加标量：中间液 0.1 μg/mL, 加200 μL |
添加水平100.0 μg/kg 加标量：中间液 1.0 μg/mL, 加200 μL |
基质效应 |
|
四环素 |
109% |
93% |
62% |
|
土霉素 |
82% |
98% |
52% |
|
金霉素 |
91% |
86% |
33% |
|
多西环素 |
96% |
89% |
31% |
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标准品四环素类药物(10.0 μg/L)检测的MRM图
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龙利鱼基质匹配四环素类药物(10.0 μg/L)检测的MRM图
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草鱼基质匹配四环素类药物(10.0 μg/L)检测的MRM图
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海水虾基质匹配四环素类药物(10.0 μg/L)检测的MRM图
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淡水虾基质匹配四环素类药物(10.0 μg/L)检测的MRM图
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龙利鱼基质匹配标准品四环素类(10.0 μg/L)检测的XIC图
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草鱼基质匹配标准品四环素类(10.0 μg/L)检测的XIC图
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海水虾基质匹配标准品四环素类(10.0 μg/L)检测的XIC图
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淡水虾基质匹配标准品四环素类(10.0 μg/L)检测的XIC图
相关产品信息
|
名称 |
规格 |
货号 |
|
标准品 |
||
|
四环素[60-54-8] Tetracycline |
100 mg |
47806 |
|
金霉素[57-62-5] Chlortetracycline |
100 mg |
47807 |
|
土霉素[79-57-2] Oxytetracycline |
100 mg |
47808 |
|
多西环素[564-25-0] Doxycycline |
100 mg |
47809 |
|
样品前处理 |
||
|
亲水亲脂平衡柱ProElut PLS |
60 mg/3 mL 50/pkg |
68003 |
|
12管防交叉污染真空SPE萃取装置 |
12位 |
244358 |
|
1,3,6 mL柱管通用连接器 |
15/pk |
4803 |
|
考克(控制流量) |
15/pk |
4806 |
|
真空/正压两用泵，无油 |
1/pk |
99011 |
|
抽滤瓶套装(包括硅橡胶管2米,2 L抽滤瓶及橡胶塞) |
1/pk |
99013 |
|
ProMax针头式过滤器 Nylon |
13 mm, 0.22 μm 100/pk |
37177 |
|
色谱柱 |
||
|
HPLC/UPLC兼容色谱柱 Leapsil C18 |
100 x 2.1 mm, 2.7 µm |
86005 |
|
高纯试剂·缓冲盐 |
||
|
乙腈 HPLC级 |
4 L |
50101 |
|
乙腈 LC-MS级 |
4 L |
50163 |
|
甲醇 HPLC级 |
4 L |
50102 |
|
甲醇 LC-MS级 |
4 L |
50164 |
|
正己烷HPLC级 |
4 L |
50115 |
|
乙酸乙酯 HPLC级 |
4 L |
50104 |
|
甲酸 HPLC级 |
50 mL |
50144 |
|
甲酸 LC-MS级 |
50 mL |
50153 |
|
磷酸氢二钠，无水，HPLC级 |
100 g |
50158 |
|
通用消耗品 |
||
|
瓶架/白色 |
50孔 |
52401A |
|
瓶架/蓝色 |
50孔 |
52401B |
|
样品瓶 (棕色/螺纹) |
2 mL, 100/pk |
1034 |
|
样品瓶盖/含垫 (已经组装) |
100/pk |
1035 |
|
HPLC 进样针, 平头 |
10 μL |
H80365 |
红色产品货号#1034、#1035火热促销中……