4μ8C是高效的选择性IRE1 Rnase抑制剂，IC50为76 nM。

特性

IRE1 Rnase选择性抑制剂，用于开发新的局部作用药物的平台。

靶点

体外研究

4μ8C阻断基底(RIDD)接近IRE1的活性部位，并选择性使Xbp1 剪接作用和IRE1介导的mRNA降解失活。IRE1抑制随后诱导内质网应激，而没有可测量的急性毒性。4μ8C，作为IRE1抑制剂，阻断CD4+ T 细胞中IL-4，IL-5，和IL-13的产生。

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

4.8976 mL

24.4882 mL

48.9764 mL

5 mM

0.9795 mL

4.8976 mL

9.7953 mL

10 mM

0.4898 mL

2.4488 mL

4.8976 mL

50 mM

0.0980 mL

0.4898 mL

0.9795 mL

体外 IRE1 RNase 和 RIDD 试验:
放射性标记的Xbp1底物裂解分析如先前方法进行，除了哺乳动物IRE1反应缓冲液的使用。使用T7-MAXIscript试剂盒，在32P ATP或Cy5-UTP存在下，通过从小鼠 Min6细胞(Ins2)的RT-PCR或无性繁殖XBP1 cDNA 的PCR分离得到的模板，体外转录合成RIDD。得到的产品通过凝胶纯化以得到全长底物。然后反应被15% UREA-PAGE分离用于分析，通过感光成像或近红外呈像，使用LI-COR Odyssey扫描仪。

细胞实验：

• Cell lines: 野生型 MEFs
• Concentrations: ~128 μM
• Incubation Time: 24小时
• Method: 将细胞分别以5 × 103或5 × 104个细胞每孔的密度接种于96或24孔板，在无酚红细胞培养基中进行培养。将培养基培育16小时，再用4μ8C处理24小时。然后培养基中加入200 μM WST1 和 10 μM吩嗪N-甲硫酸盐进行分析。反应物在37°C下反应2小时后，水解染料在450 nm的吸光度减去背景在595 nm的吸光度进行检测。或者，细胞活性通过用结晶紫染色培养基的贴壁细胞进行确定。上染率的定量通过着色细胞用过量水和结晶紫的甲醇溶液洗涤，然后在595 nm下测定吸光度进行分析。