Flavopiridol HCl与ATP竞争性抑制CDKs，作用于CDK1，CDK2，CDK4和CDK6，无细胞试验中IC50为~40 nM。作用于CDK1/2/4/6比作用于CDK7选择性高7.5倍。Flavopiridol最初被发现可抑制EGFR和PKA。

靶点

体外研究

Flavopiridol最初被发现抑制表皮生长因子受体和蛋白激酶A的活性，IC50分别是21 μM and 122 μM。Flavopiridol是后来证明能够抑制细胞的增殖，在多种生理相关浓度(IC50 = 66 nM)，在肿瘤细胞系美国国家癌症研究所开发治疗计划中的60种人癌细胞系测试过。Flavopiridol以时间和浓度依赖性方式诱导人类乳腺癌细胞G1期阻滞并抑制CDK2和CDK4。Flavopiridol短时处理（约12小时）诱导造血细胞系的细胞凋亡，包括SUDHL4，SUDHL6（B细胞系），Jurkat和MOLT4（T细胞系）和HL60（髓细胞系）。在克隆形成实验中，Flavopiridol在23人肿瘤模型中表现高细胞毒性，平均IC70是8 ng/mL。最近的一项研究表明Flavopiridol诱导人脑胶质瘤T98G细胞系的AKT-Ser473磷酸化。

体内研究

以最大耐受剂量10 mg/kg/day在第1-4天及7-11天给药，Flavopiridol表现为PRXF1337肿瘤消退和PRXF1369肿瘤停滞为期4周。 用7.5 mg/kg Flavopiridol静脉内（IV）或腹膜内连续注射5天后，12分之11的皮下（SC）人HL-60 移植鼠的肿瘤完全消退，Flavopiridol治疗一疗程后移植鼠数月无病。在SUDHL-4皮下注射淋巴瘤模型鼠中静脉注射Flavopiridol （7.5 mg/kg），模型鼠的肿瘤大部分（8分之2）或者完全（8分之4）消退，两只剩余动物无病超过60天。整体生长延迟73.2％。

SNS-032 (BMS-387032)

MB4353

THZ1

MB4229

夫拉平度(Alvocidib)

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.2815 mL

11.4077 mL

22.8154 mL

5 mM

0.4563 mL

2.2815 mL

4.5631 mL

10 mM

0.2282 mL

1.1408 mL

2.2815 mL

50 mM

0.0456 mL

0.2282 mL

0.4563 mL

重组CDKs激酶反应:
CDKs的活性按如下方式在酶标板中，40 μg GST-R b与不同量Flavopiridol和未标记的ATP混合。反应然后通过加入S100的馏分从表达重组人CDK的昆虫细胞中得到的硫酸铵沉淀部分的开始。最终反应条件为10 mM MgCl2, 50 mM Tris-HCl (pH 7.5)和1 mM DTT。ATP的终浓度做相应的调整。放射性标记的ATP作为磷酸供体。该反应在30℃下加入酶后进行2.5分钟，然后加入EDTA终止。GST-Rb用谷胱甘肽 – 琼脂糖标记和掺入的放射性通过液体闪烁计数测定。

细胞实验

• Cell lines: SUDHL4, SUDHL6, Jurkat, MOLT4和HL60细胞
• Concentrations: 0, 100 500, 5000 nM
• Incubation Time: 14小时
• Method: 在密度为1 × 106 cells/mL的细胞中不同时间加入不同浓度的Flavopiridol。提取DNA。细胞用冷的磷酸盐缓冲盐水（PBS）洗涤一次并在4℃条件下在3 mL裂解缓冲液（5 mM Tris-HCL [pH 7.5]; 20 mM EDTA; 0.5% Triton X-100）中裂解15分钟。将细胞裂解物的染色质（以26,000 g，4℃，20分钟）离心分离。用苯酚，酚氯仿（1:1）和氯仿从上清液提取提取小的DNA片段。核酸在-20℃中在0.5M氯化钠，90％的乙醇沉淀过夜。RNA由牛RNAaseA消化（60μg/mL）。连续反萃取和沉淀后，DNA溶解在10mM Tris-HCl（pH值7.5），1mM的EDTA，0.5％十二烷基硫酸钠（SDS），而后在1.6％琼脂糖凝胶上电泳。

动物实验

• Animal Models: 人类前列腺癌异种移植，PRXFI337和PRXFI369，皮下种植在裸鼠中
• Formulation: 溶解在水中
• Dosages: 10 mg/kg/d
• Administration: 在days 1-4 and 7-11口服。