MN-214是HMN-176的前体药物,改变了Plk1的细胞空间定位。

靶点

Polo样激酶(Plk)1

IC50

118 nM (IC50，作用于肿瘤细胞)

体外研究

HMN-214是口服药物前体，可快速转化为HMN-176。而HMN-214在体外的实验数据很少。然而, HMN-176为HMN-214的活性代谢形式,具有广谱抗癌活性，有效作用于多种癌细胞，包括 HeLa, PC-3, DU-145, MIAPaCa-2, U937, MCF-7, A549,和WiDr,平均IC50为118 nM。HMN-176 作用于耐药的人和鼠细胞系，包括P388/CDDP, P388/VCR, K2/CDDP,和 K2/VP-16时,具有毒性，IC50为143 nM–265 nM。3 μM HMN-176作用于HeLa细胞，使细胞周期停在G2/M 期。HMN-176 作用于抗Adriamycin的K2/ARS 细胞,抑制细胞生长，IC50 为2 μM。3 μM HMN-176下调多元抗药性基因(MDR1)的表达,因为NF-Y转录因子与 MDR1 启动子的结合被干扰。2.5 μM HMN-176 作用于人RPE1和CFPAC-1 细胞,延迟合适纺锤体装配检验点的形成。250 nM-2.5 μM HMN-176抑制减数分裂纺锤体装配。2.5 μM HMN-176 也抑制人中心体形成微管。这些结果说明 HMN-176 是通过干扰有丝分裂过程中中心体调节的MT装配而发挥抗癌活性。

体内研究

HMN-214是HMN-176 的口服药物前体，具有较高的口服吸收性。因此, 在体内实验时，用HMN-214 代替HMN-176。HMN-214按30 mg/kg剂量处理小鼠，不会引起明显的神经毒性。HMN-214 按10 mg/kg–20 mg/kg剂量作用于携带PC-3, A549, 和WiDr移植瘤的小鼠，抑制肿瘤生长。HMN-214 按10 mg/kg–20 mg/kg剂量作用于携带多元抗药性KB-A.1细胞的裸鼠模型，显著抑制MDR1 mRNA 表达。

特征

HMN-214 是HMN-176的口服药物前体， 是口服有效的Polo样激酶(Plk)1 抑制剂。

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.3559 mL

11.7794 mL

23.5588 mL

5 mM

0.4712 mL

2.3559 mL

4.7118 mL

10 mM

0.2356 mL

1.1779 mL

2.3559 mL

50 mM

–

–

–

体内Spisula卵母细胞纺锤体的装配:
为了用延时视频显微镜观察，10% v/v Spisulao卵母细胞悬浮液在过滤的海水中制备。加入溶于 DMSO的 HMN-214，终浓度为 0.25 μM, 在室温下温育10分钟，使用70 mM KCl激活卵母细胞。加入HMN-214或HMN-176 或DMSO制备适当浓度 KCl 储液，在终悬液中维持适当浓度。Oocyte卵母细胞悬液在载玻片上制备，使用Zeiss Axiophot偏振光显微镜，配备20X/0.50 NA物镜和Hamamatsu SIT-摄像机及联合Metamorph 图像处理软件进行检测。用于免疫荧光(IMF)研究, 在不同时间点(0, 4, 8, 16, 25, 35, 和 45 分钟),转移卵母细胞悬液等分到固定液 (0.6% Brij-58, 4% 甲醛, 100 mM PIPES, 5 mM EGTA, 1 mM MgCl2, 用NaOH调pH 为 6.8) 中，维持15分钟，在PBS中冲洗,然后在PBS中用 3% 牛血清蛋白进行“封锁”。为了观察微管，用原代大鼠α-tubulin抗体标记卵母细胞，在PBS中清洗,然后用抗鼠抗体联合的Alexa Fluor 488的二抗进行标记。在最后洗涤步骤之一中加入1 μg/mL Hoechst 33342，用于观察染色体。用Zeiss AxioImager Z1 系统，配备40X/1.3 NA 物镜，联合Axiovision软件观察卵母细胞。

细胞实验

• Cell lines: HeLa, PC-3, DU-145, MIAPaCa-2, U937, MCF-7, A549,和WiDr 细胞
• Concentrations: 0-10 μM, 溶于DMSO
• Incubation Time: 72小时
• Method: 细胞按每孔3×103-1×104个接种在96孔板上。第二天，加入 HMN-214或 HMN-176稀释液，温育72小时。通过MTT实验测定对细胞生长的抑制情况，获得IC50值。

动物实验

• Animal Models: 携带PC-3, A549,和WiDr移植瘤的雄性BALB/c裸鼠
• Formulation: 溶于0.5%甲基纤维素
• Dosages: 10 mg/kg-20 mg/kg
• Administration: 口服饲喂